Структура аппарата инфицирования бактериофага T4

• Автор: Костюченко, Виктор Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 105 с. : ил.

Оглавление
1 Введение

1.1 Актуальность проблемы

1.2 Цели и задачи работы

1.3 Научная новизна н практическая ценность работы . . . .

2 Обзор литературы

2.1 Методы пространственной реконструкции.

2.2 Подготовка и съмка образцов в ЭКМ .

2.3 Формирование изображения в электронном микроскопе

2.4 Предварительная обработка и оценка качества получен пых данных

2.5 Подготовка исходных проекций

2.6 Определение параметров ориентации проекций
2.7 Реконструкция.
2.8 Разрешение. Оценка качества реконструкции.виду . . .
2.9 Встраивание атомных структур субъединиц в реконструированную модель.
2. Заключение.
3 Материалы и методы
Оглавление З
3.1 Получение и подготовка образцов для ЭКМ и получение
изображений
3.2 Обработка снимков и поиск изображений для реконструкции
3.3 Трхмерная реконструкция БПХС.
4 Результаты исследований
4.1 Структура БПХС
4.2 Встраивание пг 1.
4.3 Структура и расположение пг9
4.4 Структура и встраивание пг8.
4.5 Структура комплекса пг5пг
4.6 Короткие фибриллы, пг
4.7 Белки с неизвестной атомной структурой
5 Обсуждение результатов
Заключение
Выводы
Литература


Научная новизна н практическая ценность работы . Методы пространственной реконструкции. Подготовка и съмка образцов в ЭКМ . Реконструкция. Разрешение. Оценка качества реконструкции. Встраивание атомных структур субъединиц в реконструированную модель. Заключение. Трхмерная реконструкция БПХС. Встраивание пг 1. Структура и встраивание пг8. Знание структуры вирусов и особенностей их формирования необходимо для разработки новых эффективных подходов в борьбе с вирусными инфекциями. Вирусы также являются удобной экспериментальной модельной системой для изучения механизмов ассоциации белковых субъединиц, которая может помочь в понимании процессов формирования сложных биологических структур клетки, таких как ядерные поры, цснтриоли, жгутики, компоненты мышечных фпламипо Вирусы разделяют на группы в соответствии со способом храпения генетической информации, например, одно или двунитевая ДНК или РНК, и их устройством палочкообразные, нитчатые, сферические, сложные с хвостом, сферические с внешней липидной оболочкой и внутренним белковым нуклсокапсидом и так далее 9. Простейшие вирусы типа сателлитного вируса некроза табака СВИТ, геном которого кодирует всего один белок 5, имеют икосаэдрическую форму и сравнительно маленькие размеры диаметр капсида СВНТ всего 0 А . Одними из самых сложных по строению вирусов являются ак называемые хвостатые бактериофаги представители отряда СатЬп г. Лл фаги, имеющие способный сокращаться хвост, относятся к сом . Глава 1. I . Рис. Бактериофаг Т4 . Рисунок взят из . vii. Один из них, бактериофаг Т4 , инфицирующий бактерию ii i, является одним из основных модельных объектов молекулярной биологии. Частица бактериофага Т4 рис. ДНК размером 2 тысячи пар оснований , и хвоста, который присоединн к капсиду через специальный портал на одной из вершин с симметрией 5го порядка. Капсид фага Т4, около 0 в поперечнике и А длиной, удлинн вдоль оси, проходящей через хвост и портал, и построен из большого числа копий белков пг 0 копий, пг копий, от i ii i, 5 копий и от i, 0 копий . Портал содержит копий белка пг. Сократимый хвост состоит из трх частей шейки, хвостового стержня. Глава 1. К шейке, построенной из гексамеров пг, пг иили пг, присоединены воротничок и бакенбарды, состоящие из тримеров белка фибритина ппуас воротничок повидимому, содержит также один из белков ПГЗ или ПГ4. Основную часть хвоста занимает сократимый хвостовой чехол и расположенный внутри него хвостовой стержень. Чехол построен из пг, а стержень из пг. Завершает хвост базальная пластинка многокомпонентная молекулярная структура диаметром около 0А и высотой в 0 А, состоящая из различных белков, практически каждый из которых является олигомером. В состав базальной пластинки входят пг5, пгб, пг7, пг8, пг9, пгЮ, пг, пг, пг, пг, пг, пг, пг, пг, и пг. К базальной пластинке присоединены длинные хвостовые фибриллы, построенные из пг, пг, пгЗб и пг. Таким образом, одних только структурных белков в частице фага имеется более тридцати, не считая белков, связанных с упакованной внутри капсида ДНК, вспомогательных скаффолдбелков и белковшаперонов табл. Процесс сборки частицы бактериофага Т4 достаточно сложный, многостадийный процесс , . Сборка капсида с последующей упаковкой в него геномной ДНК происходит независимо от сборки хвоста. Постройка хвоста рис. Сборка клина начинается с формирования комплекса белков 7 Юз з, к которым присоединяются белки пгб и пг8 . Затем присоединяются белки пг и пг . Центральная втулка образуется из тримеров пг5, пг и пг с помощью вспомогательных белков пг и пг. Глава 1. 3 II 1. I1. 9РЮ1 7 3. V97. I . Х1. Vi7x. . Рис. Порядок сборки вирусной частицы.