Исследование корреляций экспрессии опухолеспецифического белка сурвивина и его природных ингибиторов SMAC и PML

• Автор: Вайшля, Наталья Аркадьевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Апоптоз запрограммированная клеточная смерть

2.1.1 Молекулярные механизмы апоптоза

Каспазы

Семейство белков Вс12.

2.1.2 Внешний путь развития апоптоза.

2.1.3 Внутренний митохондриальный путь развития апоптоза.

2.2. Ингибиторы апоптоза.

2.3. Сурвивин
2.3.1 Структура сурвивина
2.3.2 Экспрессия гена I5
2.3.3 Биологические активности сурвивина2.
Ингибирование апоптоза.
Роль сурвивина в митотическом делении клетки.
Влияние сурвивина на ангиогенез
2.4. i i ген промиелоцитарной лейкемии
2.4.1 Структура гена и классификация изоформ мРНК
2.4.2 Доменная структура белка , характеристика его изоформ и комнартментализации в клетке.
2.4.3 Экспрессия гена
2.4.4 Биологические активности .
регулятор экспрессии генов.
Супрессия клеточного роста и проапоптотическая активность
Противовирусная активность .
2.5. I iiiv iv
2.5.1 Структура I
2.5.2 Экспрессия гена I
2.5.3 Проапоптотическая активность I.
2.6 Заключение.
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. МАТЕРИАЛЫ.
3.2 МЕТОДЫ.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Введение
4.2. Анализ экспрессии гена I5 и генов его ингибиторов и
Анализ экспрессии генов I5, и в опухолевых и нормальных тканях
человека при немелкоклеточном раке легкого и плоскоклеточном раке пищевода
Анализ экспрессии генов I5, и в опухолевых клеточных линиях человека.
4.2. Создание экспрессиониых генноинженерных конструкций, содержащих гены и
4.3. Получение клеточных линий А9, , и I8, стабильно экспрессирующих и .
4.4. Анализ эффекта экспрессии гена в условиях транзиентной трансфекции клеток линий , А9 и НТ плазмидой 11
4.5. Анализ влияния повышенной экспрессии Сконцевого фрагмента
на активность промотора гена I5.
4.6 Анализ чувствительности к противоопухолевому препарату цисплатину клеток линий А9, i, i1 и I8.
4.7 Анализ влияния стабильной экспрессии гена на клеточную пролиферацию и чувствительность к противоопухолевому препарату
цисплатину клеток линий А9, , 1 и I8
4.8. Заключение
5. ВЫВОДЫ .
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Терапевтический противопухолевый эффект белка , в том числе его влияние на активность белка сурвивина, в большинстве работ наблюдали при непосредственной обработке клеток препаратом белка 57, и лишь в нескольких работах проводили исследование возможности использования генноинженерных экспрессионных терапевтических конструкций, содержащих кДНК 8, 9. Способность подавлять активность промотора I5 и уменьшать количество эндогенного сурвивина в опухолевых клетках была изучена лишь в двух работах и показана только для одной изоформы , 6 3, . Настоящая работа состоит из двух частей. В первой части проведено исследование экспрессии генов I5, и в опухолевых и нормальных тканях пациентов с диагнозами немелкоклеточпый рак легкого и плоскоклеточный рак пищевода, а также в опухолевых клеточных линиях человека. Было определено, что увеличение экспрессии гена 15 в опухолевых тканях по сравнению с нормальными не коррелирует с изменениями экспрессии генов и . Во второй части изучали влияние стабильной и транзиентной экспрессии и 1 наиболее представленной изоформы в клетке на клетки опухолевых клеточных культур человека. Было показано, что стабильная экспрессия не влияет на клеточную пролиферацию и чувствительность к противоопухолевому препарату цисплатину клеток линий А9, i, и I8. Транзиентная и стабильная экспрессия последовательности кДНК , кодирующей Сконцевой фрагмент белка 1, в опухолевых клетках человека вызывает выраженный апоптотичсский эффект. Цслыо данной работы было выявление корреляций между экспрессией сурвивина и его ингибиторов на уровне РНК и белка в нормальных и опухолевых тканях пациентов с диагнозом немелкоклеточный рак легкого и плоскоклеточный рак пищевода и оценка терапевтического потенциала природных ингибиторов сурвивина и в генной терапии злокачественных опухолей. Онкологические заболевания являются одной из важнейших причин смертности в мире и их число с каждым годом растет. Нарушение процесса программируемой клеточной гибели, или апоптоза, играет ключевую роль в прогрессии злокачественных опухолей. Процесс апоптоза контролируется большим числом индукторов и ингибиторов . Семейство белковингибиторов апоптоза I Iii i i включает в себя белки различного происхождения, способные ингибировать процесс апоптоза путбм снижения активности каспаз . Сурвивин I5 уникальный белок семейства I, который участвует в трех клеточных процессах ангиогенез, клеточное деление и процесс апоптоза и экспрессируется на повышенном уровне практически при всех типах рака 1. и природные ингибиторы сурвивина 2, 3, которые могут быть использованы для подавления сурвивина в опухолевых клетках. Аноптоз, или запрограммированная клеточная смерть, это естественный физиологический процесс, который играет важную роль в развитии организма, клеточной дифференцнровке, иммунных реакциях на внедрение патогена и поддержании тканевого гомеостаза у животных. В норме апоптоз функционирует как механизм, контролируюндай количество и качество клеток, поддерживая тканевой гомеостаз в организме. Элиминируются ненормальные, функционально неактивные клетки, в том числе клетки, функции которых нарушены под влиянием факторов абиотической природы активные формы кислорода, антиметаболиты, УФоблучение. Апоптоз играет важную роль в противораковой защите организма, способствуя удалению потенциально опасных клеток, появившихся в результате мутаций, а также клеток ткани, потерявших контакты с другими клетками и свободно блуждающих по организму. Нарушение механизма апоптоза играет ключевую роль во многих патологических процессах, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, цирроз печени, красная волчанка, бронхиальная астма и др. В частности, потеря способности клеток вступать в апоптоз в ответ на проапоптотичсские стимулы является причиной возникновения злокачественных новообразований , . Апоптоз в переводе с греческого языка опадание листьев был впервые описан в работе Керр и соавт.