Химико-ферментативный синтез модельного гена кальцитонина человека

• Автор: Голова, Юлия Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 c. : ил

В ре
зультате экспрессии этих генов получены соматостатин, инсулин, интерферон и др. К числу важнейших пептидных гормонов принадлежит кальцитонин. Клесте с паратироидным гормоном и витамином Д он осуществляет регуляцию метаболизма кальция и неорганического фосфата в организме. Основная физиологическая функция кальцитонина заключается в предотвращении гиперкальцемии, потенциально возможной при поступлении в организм кальция, ингибировании скелетной ресорбции и стимуляции переноса кальция из крови в костную ткань А,6. Цель данной диссертационной работы химикоферментативный синтез модельного гена кальцитонина человека. Настоящая работа составляет часть исследований, проводимых в отделе генетической инженерии ИМБ АН СССР, по изучению экспрессии генов пептидных гормонов в прои эукариотических системах. Современное состояние нуклеотидного синтеза, его успехи и проблемы широко представлены в обзорах Отсуки, Итакуры, Шабаровой и др. I5. В данном обзоре предпринята попытка обобщить наиболее интересные результаты работ по синтезу олигодезоксирибонуклеотидов за последние года, которые, по нашему мнению, отражают общие тенденции его развития. Второй раздел обзора посвящен использованию синтетических фрагментов ДНК в конструировании искусственных генетических структур. Эта область применения синтетических олигонуклеотидов, являясь одной из наиболее важных, охватывает широкий крут возможных вариантов их приложения в биологических исследованиях. Подробные сведения о разнообразном использовании синтетических олигонуклеотидов в молекулярной биологии и генетической инженерии тлеются в обзорах 2,3, . В настоящее время наиболее распространенным методом синтеза олигонуклеотидов является фосфотриэфирный 9,. На рис. К5 защитные группы Рис. Мононуклеотиды 3 и 4 служат исходными соединениями в фосфатном и фосфитном вариантах триэфирного метода синтеза 1,,. Направленный химический синтез фрагментов ДНК проводят в растворе иили на полимерном носителе. Нуклеотиды 3 применяются в обоих случаях, тогда как нуклеотиды 4 используют, главным образом, в синтезе на полимерных носителях. Непосредственными предшественниками соединений 3 и 4 явля
ются ЫОзащищенные нуклеозиды 2. Для защиты первичного гидроксила рибозного остатхса нуклеозидов используют, преимущественно, моно и диметокситритильные группы
5а и на рис. Арилметановые, а такяе ряд других ОНзащитных групп, не нашедших широкого применения см. Сведения об условиях их введения и знятия описаны в работах и обзоре I. СНгС 2СНгСНг0Л0
5. I, осн
Основное внимание в этой главе уделено проблеме совершенствоватя способов запщты функциональных групп оснований нуклеозидов. Общепринятыми защитами для экзоциклических аминогрупп сдуяат бензоильная для я изобутирильная для . Проведенные недавно кизетические исследования реакций ацилирования и деацилирования зунлеозидов показали, что бензоильная и изобутирильная группы является оптимальными защитами, хотя первоначальный их выбор произошел эмпирически . Способ получения ацилированных нуклеозидов, разработанный Кораной, до недавнего времени оставался практически единственно надежзым вариантом подобного рода превращений . Он состоит в исчерпызающем ацилировании нуклеозида см. З на примере 2дезоксиаденозина и избирательном удалении защитных групп под действием 1н эдкого натра. Ю И
Усилия многих исследователей были направлены на разработку методов селективного ацилирования нуклеозидов. Такие попытки увенчались успехом только в случае 4С, например, при использовании в качестве ацилирущего агента пентафторфенилбензоата . Очевидные недостатки поэтапного введения ацильных защит метод Кораны, равно как и отсутствие универсального селективного метода защиты для всех оснований, стимулировали поиск принципиально новых решений данной проблемы. В г. Ти с сотр. ВгСС или СаНС0х0 НО . У
Рис. Такой способ можно считать практически одностадийным, поскольку обработка нуклеозида I триметилхлорсиланом, ацилирующим реагентом и водным аммиаком протекает в одном реакционном сосуде в среде одного растворителя пиридина.