Особенности репликации и структуры ДНК малых колициногенных плазмид

• Автор: Зверев, Виталий Васильевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 190 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

МЕХАНИЗМЫ РЕПЛИКАЦИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПЛАЗМИД II

Глава I. Участие клеткихозяина в репликации

плазмидной днк . II

1.1. Роль ДНКлолимераз . II

1.2. Роль синтеза белка и РНК .

1.3. Участие продуктов v генов

Глава 2. Механизмы регуляции репликации

плазмиды xI и других плазмид Iтипа .

2.1. Инициация синтеза i
нити ДНК I .
2.2. Инициация репликации ,i
нити ДНК Со1
2.3. РНК I основной негативноконтролирующий фактор инициации репликации
и несовместимости плазмид Iтипа .
2.4. Белок ор негативно контролирующий элемент инициации репликации
плазмид Iтипа .
Стр.
Глава 3. Структура репликативного аппарата и контроль инициации репликации плазмид не СоЕ1типа
3.1. Оридаины и направление репликации
3.2. Структура репликативных участков
и плазмидоспецифические белки, позитивнорегулирующие репликацию плазмидной ДНК .
3.3. Регуляция инициации репликации и
несовместимости
3.4. Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава I. Анализ мультидлазмидных колициноген
ных штаммов В. соИ
Глава 2. Регуляция функционирования генов, ответственных за синтез колицинов А, 0 9 К
Глава 3. Репликация колициногенных плазмид в условиях подавления синтеза белка.
Глава 4. Потребность в ДНКполимеразе I для репликации колициногенных плазмид
Стр.
Глава 5. Репликация колицкногенных плазмид
в па. мутантах .
Глава 6. Совместимость плазмид СоА, ,
и СоЕ1 .
Глава 7. Рестрикционное картирование плазмид
Ык, и. СоК
Глава 8. Молекулярное сравнение малых колици
ногенных плазмид
Глава 9. Клонирование Фрагмента ДНК плазмиды ответственного за ее автономную репликацию
Глава .Нуклеотидная последовательность участков плазмид Сск и СоЦ ответственных за их автономную репликацию .
Глава II.Локализация промоторов для РНК I
и праймерной РНК
Глава .Вторичная структура праймерной РНК
и РНК I .
Глава .Нуклеотидная последовательность
прилегающих к ом участков плазмид
СсА
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
I Стр.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Ларк и Ренддер , к огде Г, показали, что в инициации репликации хромосомной ДНК принимают участие по крайней мере два типа белков, обладаицих различной чувствительностью к ингибитору белкового синтеза хлораменинолу. Эти белки образуются последовательно в определенные моменты клеточного цикла перед каждым актом инициации репликации бактериальной хромосом. При подавлении белкового синтеза хлорамениколом или при аминокислотном голодании, заканчиваются начатые циклы репликации, но не происходит инициации новых. Роль синтеза белка в инициации репликации плазмидной ДНК достаточно хорошо изучена. Показано, что репликация больших трансмиссивных плазмид в условиях подавления белкового синтеза, так не, как и репликация хромосомной ДНК, прекращается. Эти данные получены для плазмид и различных к факторов , i , , , к i , Тега. , , i i . Одним из основных отличий репликации малых мультикопийных плазмид от репликации хромосомы и больших плазмид является способность реплицироваться при подавлении белкового синтеза. Показано, что при действии на клетку хлорамфеникола или при аминокислотном голодании репликация плазмид i г ага. i , , , В 3 V Аапр , I5 iv , . ДНК. ДЖ на клетку резко возрастает до копий для СоЙВ на клетку С Еиге. Как показано для СоЙВ, большинство копий ее ДЕШ в этом случае находится в ковалентнозамкнутой кольцевой форме, однако молекулы ДНК СсбЕ содержат в своем составе фрагменты РНК. Об этом свидетельствует тот факт, что при обработке таких молекул ДНК РНКазой или щелочью в них появляются одноцепочечные разрывы ВВасг еВ , сп6 . Вероятно, молекулы СоЙВ, образованные в присутствии хлорамфеникола, являются промежуточными репликативными формами с остатками неудаленной праймерной РНК, синтезирующейся на ранних этапах репликации. СоЙВ САгоеке , , СРАЗ УеНкатр а А Ме3. О. еТ СгоАа е РНК рифамшщинчувствительной ДНКзависимой РНКполимеразой. Изучение репликации плазмиды СоЙВ в опытах п ускго подтвердило, что РНКполимераза во время инициации репликации синтезирует РНКзатравки праймеры в строго определенном месте на ДНК СоЙВ То т. С г а па, СоССи л Тот 2. ТоА, Тотга. Механизмы этого процесса будет рассмотрены ниже. РНКполимераза необходима также и для инициации репликации больших трансмиссивных плазмид оАпкоп, к. . Цгетепд , апоискоа , Ьа . . ТоссАп Уа,гААп. Епе , . Е. со но также и для репликации плазмидной ДНК. Необходимо отметить, что у ряда плазмид способность реплицироваться при подавлении синтеза белка всегда сочетается с потребностью для репликации в ДНКполимеразе I. Такая особенность репликации отмечена у плазмиды Со, а также плазмид рА, , Вк2. Кроме того, как будет показано ниже, в репликации этих плазмид имеется еще целый ряд общих свойств, поэтому в дальнейшем мы будем именовать их плазмидами СоЙЕ1типа или СоЙИподобными плазмидами. Участие продуктов . Известен целый ряд генов В i , принимающих участие в репликации хромосомной ДНК. В настоящее время выделены и охарактеризованы температурочувствительные мутанты по этим генам. По фенотипическим признакам эти мутанты можно разделить на два класса мутанты, в которых блокирована инициация репликации хромосомной ДНК , i С, Ли, и и мутанты, в которых блокирована элонгация репликации хромосомы Х i , . V , , . Это деление несколько условно, так как недавно было показано, например, что продукт гена С в элонгации репликации хромосомной ДНК . Синтез ДНК в этих двух группах мутантов ингибируется неодинаково. В мутантах по инициации репликации синтез ДНК снижается постепенно и останавливается через 2 часа. Это обусловлено тем, что в этих мутантах в непермиссивных условиях запрещается лишь инициация новых циклов репликации те циклы репликации, которые уже начались, завершаются.