Подавление экспрессии генов-супрессоров опухолевого роста при немелкоклеточном раке легкого

• Автор: Анедченко, Екатерина Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 110 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ОБОЗНАЧЕНИЯ ГЕНОВ

ВВЕДНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация рака легкого

1.2. Молекулярные нарушения при раке легкого

1.3. Роль хромосомы 3 в возникновении и развитии рака легкого

1.3.1. Генысупрессоры опухолевого роста области АР и

1.4. Методы оценки экспрессии генов

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материа
2.1.1. Образцы тканей
2.1.2. Образцы кДНК
2.1.3. Праймеры и зонды 4
2.2. Методы
2.2.1. Выделение РНК
2.2.2. Выделение ДИК
2.2.3. Реакция обратной транскрипции
2.2.4. Полимеразная цепная реакция в реальном времени ПЦРРВ
2.2.5. Анализ продуктов ПЦРРВ
2.2.6. Статистический анализ данных Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Разработка методической базы для ПЦРРВ 5
3.1.1. Выбор наборов реактивов для ПЦРРВ
3.1.2. Выбор контрольных генов и образцов сравнения для ПЦРРВ
3.1.3. Положительный контроль ПЦРРВ
3.2. Количественная оценка уровня мРНК генов 3,
21, АЭТХ4, ГСЛ9, К4Г7 и НУАЬ2 при НМРЛ
3.2.1. Гены, кодирующие белки, участвующие в регуляции клеточного цикла ЯВБРЗСТОЗРЬ, ЯРЯЬ2Ю, ШРЛ
3.2.2. Гены, кодирующие белки, участвующие в регуляции ангиогенеза и клеточной адгезии .1ЮА9, НУАЫ и НУАВ2
3.3. Сравнение уровней мРНК генов в одних и тех же опухолях легкого
3.3.1. Корреляции между изменением уровня мРНК исследуемых генов в разных группах больных
3.4. Ассоциация подавления экспрессии генов КВ8РЗСТОБРЬ, 1ТОА9 и 1ГУАЬ2 при НМРЛ с делениями и метилированием их промоторных областей
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Известно, что белковые продукты генов из этой области выполняют в клетке разнообразные ключевые функции регуляция клеточного цикла и адгезии, инициация апоптоза, репарация ДНК и др. Для некоторых из них доказана принадлежность к супрессорам опухолевого роста например, 22, 1, , 1, 2, 2, 3, 1 изоформы А и С. Однако для большинства генов Зр до сих пор не ясна роль в канцерогенезе. На сегодняшний день внимание исследователей направлено, в основном, на изучение структурных изменений интересующих генов, а также функциональных изменений кодируемых ими белков в различных опухолях. Практически отсутствуют данные об экспрессии на уровне транскрипции большинства и кандидатов в супрессоры в опухолях. Отсутствие иили снижение количества мРНК гена в клетке с большой долей вероятности свидетельствует о снижении содержания или отсутствии соответствующего белка. Оценка содержания мРНК в опухолях один из важных этапов в функциональных исследованиях . ДНКмикропанелей стало возможным исследовать изменение экспрессии сотен и тысяч генов, однако данный метод не позволяет количественно оценивать содержание транскриптов интересующих генов, для этих целей широко используют метод ПЦР в реальном времени ПЦРРВ. Представленная работа посвящена количественной оценке уровня мРНК генов 3, 2, 1, I9, и 2 из двух областей района Зр Зр. АР Зрр. НМРЛ АК и ПКРЛ. Задачи исследования состояли в отработке методики количественных измерений уровня мРНК генов оценке уровня мРНК выбранных генов при АК и ПКРЛ сопоставлении полученных данных с клиническими характеристиками исследуемых опухолей сравнительном анализе изменения уровня мРНК генов в одних и тех же образцах НМРЛ обсуждении возможных причин, приводящих к подавлению экспрессии исследуемых генов в опухолях легкого. Стоит отметить, что эти гены не относятся к малоизученным, поскольку известны функции их белков, для 5ти, кроме I9 показана опухольподавляющая активность. Также изучали изменение экспрессии на уровне мРНК иили белка, в основном, на клеточных линиях легкого и реже в единичных опухолях легкого, с использованием качественных и полуколичественных методов. В случае генов 1, 2, и 2 исследовали роль метилирования в подавлении их транскрипции. В работе впервые методом ПЦРРВ выявлено значительное снижение уровня мРНК генов 3 2, 1, I9, 1 и 2 в большинстве опухолей легкого. Обнаружено, что частота и уровень снижений мРНК генов значительнее при ПКРЛ, чем при АК. В большинстве опухолей легкого происходит одновременное снижение содержания мРНК генов независимо от их расположения на 3р. РВ8РЗСТРЬ и 1ТСА9 при НМРЛ связано с геномными и эпигеномными механизмами. ГЛАВА 1. На сегодняшний день существует несколько классификаций опухолей легкого 1 гистопатологическая 2 клиникоанатомическая по локализации опухоли 3 международная Т1ЧМ классификация анатомическая. Согласно гистологической классификации выделяют две основные группы РЛ мелкоклеточный РЛ МРЛ и немел ко клеточный РЛ НМРЛ, составляющие и соответственно. В группу НМРЛ входят аденокарцииомы АК, плоскоклеточный ПКРЛ, крупноклеточный, мукоэпидермоидный, железистоплоскоклеточный рак и карциноид. Внутри данной группы по частоте встречаемости первое место занимает ПКРЛ случаев, АК второе случаев. ПКРЛ происходит из метаплазированного бронхиального эпителия. АК обычно является периферической субплевральной опухолью и развивается из железистых клеток слизистой бронха или из рубцовой ткани после перенесенного туберкулеза. АК протекает более агрессивно, чем ПКРЛ, интенсивно метастазирует в регионарные лимфоузлы, кости и головной мозг, образует имплаптациопные метастазы, часто сопровождается злокачественным плевритом. МРЛ в отличие от НМРЛ развивается из нейроэктодермальных клеток Кульчицкого, расположенных в базальном слое бронхиального эпителия. Это самая злокачественная разновидность легочного рака, характеризующаяся интенсивным метасгазированием и высокой метаболической активностью .