Изучение структуры геномов группы бактериофагов Bacillus thuringiensis

• Автор: Смирнов, Виктор Борисович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1983
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 131 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ .

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫII

1.1. Краткая характеристика вица микроорганизмов i iii . II

1.2. Экстрахромосомные элементы генома i iii . З

1.3. Исследование геномов с помощью рестриктаз .

1.3.1. Системы рестрикциимодификации .

1.3.2. Рестрикционный анализ вирусных и фаговых геномов.

1.3.3. Гетерогенность вирусных и фаговых популяций

1.4. Использование фаговых геномов в молекулярном клонировании

Заключение
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования.
2.2. Материалы
2.3. Методы исследования. .
2.3.1. Выращивание культуры Вас. iii .
2.3.2. Выделение фагов.
2.3.3. Электронная микроскопия фагов.
2.3.4. Определение параметров одиночного цикла развития фагов.
2.3.5. Размножение и первичное концентрирование фагов
Стр.
2.3.6. Фракционирование препаратов фагов
2.3.7. Выделение фаговых ДНК .
2.3.8. Очистка фаговых ДНК
2.3.9. Определение температуры плавления и молярного содержания ГЦпар в фаговых ДНК.
2.3 Определение контурной длины молекул ДНК. . .
2.3 Рестрикционный анализ фаговых ДНК.
2.3 Расчет максимальной частоты встречаемости
сайтов рестрикции.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Первичная таксономическая дифференциация фагов . .
3.1.1. Ультраструктура фагов.
3.1.2. Физиологические характеристики фагов
3.2. Фракционирование фаголизатов .
3.2.1. Фракционирование лизатов фагов I морфологической группы
3.2.2. Фракционирование лизатов фагов П морфологической группы
3.2.3. Фракционирование лизатов фагов Ш морфологической группы
3.2.4. Полиголовки фага I3 и Тслой клеточных
стенок Вас. iii
3.3. Изучение фаговых геномов .
3.3.1. Выделение и характеристика фаговых нуклеиновых кислот
3.3.2. Исследование структуры геномов фагов I группы
Стр.
3.3.3. Исследование структуры геномов фагов
П группы
3.3.4. Исследование структуры геномов фагов
Ш группы
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Основу бактериальных средств защиты растений составляют спорокристаллические комплексы i iii . Широкое применение микробных энтомопатогенных препаратов для регуляции численности вредных насекомых в природных и искусственных экосистемах обусловлено высокой избира тельностью действия данных препаратов по сравнению с химическими инсектицидами, и прежде всего, отсутствием токсического действия на теплокровные организмы. Однако, несмотря на успехи в технологии ферментации Вас. Возможность дальнейшего увеличения производства и повышения эффективности действия энтомопатогенных препаратов несомненно связана с накоплением и использованием в практических целях информации в области молекулярной биологии и генетики . В результате усилий различных коллективов исследователей установлена биохимическая структура энтомопатогенного кристалла , , , ПО, 9 , показано наличие в клетках Вас. Вас. Полученные в разные годы данные обобщены в ряде монографий и диссертаций I, , , , , . Особо пристальное внимание исследователей, работающих в области генетики бацилл, привлекают проблемы создания векторных систем, что мояет способствовать решению как теоретических, так и прикладных задач. При конструировании рекомбинантных молекул могут быть использованы такие генетические структуры, как геномы плазмид и умеренных фагов. Однако, по сравнению с системами . Вас. Вас. Вопервых, для плазмид и фагов Вас. Кроме того, имеются всего лишь единичные сообщения о трансдукции бактериофагами Вас. Вовторых, функции исследованных до сих пор геномов, фагов и плазмид, содержащихся в клетках Вас . Необходимым условием успешного проведения физикохимических исследований фаговых макромолекул является получение чистых препаратов фагов. В то же время анализ данных литературы, посвященных исследованию фагов Вас. Однако, учитывая лизогенный статус штаммов Вас. Цели и задачи исследования. Актуальность исследования фагов Вас. И вирулентные фаги Вас. Бепв1в. Научная новизна работы. В процессе настоящей работы выделены из различных источников фага Бао. Изучены биологические и структурные характеристики фагов. Установлен факт полилизогении штамма Ш серотипа. Вас. Изучены физикохимические параметры ДНК представителей групп фагов. Проведен рестрикционный анализ геномов фагов. Показано , что фаги Таб и Те, выделенные из штаммов 1У и У серотипов, обладают сходством структурной организации геномов. Установлено , что ДНК фага гидролизуется рядом рестриктаз с образованием фрагментов различной молекулярной массы, вследствие чего фаг Т может быть рекомендован к использованию в экспериментах по генной инженерии. Научнопрактическая значимость работы. Выделенные бактериофаги могут быть использованы в изучении взаимоотношений в системе фаг клетка Вас. Исследовано действие спектра рестриктаз на фаговые ДНК , что является необходимым этапом для использования фаговых геномов в экспериментах по молекулярному клонированию. Предложенные методические приемы выделения фагов, концентрирования и фракционирования фаголизатов могут быть использованы в лабораториях, занимающихся вопросами бактериофагии . Апробация. Генетика актиномицетов и бацилл Ереван, I Всесоюзной конференции Статистические свойства микроструктур Москва, Х1У Международном генетическом конгрессе Москва, Региональной конференции молодых ученых и специалистов Нечерноземной зоны РСФСР Ленинград, совместном заседании Ленинградского отделения Всесоюзного микро биологического общества и кафедры микробиологии биологопочвенного факультета ЛГУ Ленинград, Городской конференции молодых ученых и специалистов ЛО ВМО Микробиология народному хозяйству Ленинград, межлабораторном семинаре по генетике бактериофагов ВНИИГенетика Москва, . Материалы диссертационной работы были представлены и премированы на конкурсе работ молодых ученых Ленинградского отделения Всесоюзного микробиологического общества Ленинград, , на конкурсе работ молодых ученых Ленинградской области, посвя щенном XIX съезду ВЛКСМ Ленинград, , на Всесоюзном конкурсе работ молодых ученых Москва, .