Универсальная система интенсификации работы опухолеспецифических промоторов

• Автор: Мингалеева, Римма Ниязовна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 95 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. ГЕНЫ-«УБИЙЦЫ»
2.1.1. Тимидинкиназа вируса простого герпеса
2.1.2. Протеиназа вируса иммунодефицита человека
2.2. ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ПРОМОТОРЫ С ШИРОКИМ ДИАПАЗОНОМ СПЕЦИФИЧНОСТИ
2.2.1. Промотор гена сурвивина человека
2.2.1.1. Сурвивин
2.2.1.2. Структура промотора гена сурвивина человека
2.2.1.3. Регуляция активности промотора гена сурвивина человека
2.2.2. Промотор гена обратной транскриптазы теломеразы человека
2.2.2.1. Теломеры и теломераза
2.2.2.2. Структура промотора гена обратной транскриптазы теломеразы человека
2.2.2.3. Регуляция активности промотора гена обратной транскриптазы теломеразы человека
2.3. СПОСОБЫ УСИЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ОПУХОЛЕСПЕЦИФИЧЕСКИХ ПРОМОТОРОВ
2.3.1. Модификация собственных регуляторных элементов промотора
2.3.2. Индуцибельные системы свсрэкспрессии трансгена
2.4. TAT-TAR-CHCTEMA ВИЧ-
2.4.1. Строение LTR ВИЧ-
2.4.2. Строение TAR-элемента
2.4.3. Механизм трансактивации промотора генов ВИЧ-
2.4.4. Белок tat
2.4.4.1 .Структура белка tat
2.4.4.2.Внеклеточные функции tat
2.5. СОЧЕТАНИЕ TAT-TAR-СИСТЕМЫ ВИЧ-1 И ГЕНА HSV-tk
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. МАТЕРИАЛЫ
3.2. методы
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Сравнение активностей различных промоторных систем, регулирующих экспрессию гена HSV-t£
4.1.1. Проверка Tat-TAR-системы ВИЧ-1 на способность усиливать экспрессию гена HSV-tk
4.1.2. Оценка эффективности усиления экспрессии Tat-TAR-системы ВИЧ-1 в опухолевых клетках линии Calu-1 при стабильной трансфекции
4.1.3. Степень трансактивации промотора LTR ВИЧ-1 зависит от промотора, контролирующего активность гена tat
4.1.4. Сравнительный анализ уровня экспрессии гена Ннаправляемой различными промоторными системами
4.1.5. Определение активности НБУЧк
4.1.6. Функциональный тест на способность НБУЧк подавлять рост опухолевых клеток
4.1.7. Способы снижения базального уровня экспрессии гена НБУ-/£ в Та1-ТЛК системе
4.2. Исследование возможности применения протеиназы ВИЧ-1 в генной терапии раковых заболеваний
4.9 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
5. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
AFP -_альфа-фетопротеин
BIRC5 — baculoviral IAP repeat-çontaining 5 (survivin), белок, содержащий повторшощиеся домены бакуловирусного ингибитора апоптоза bFGF - фактор роста фибробластов (основной)
СЕА - раковоэмбриональый антиген
CDK - циклинзависимая киназа
CMV - цитомегаловирус
CTD - С-концевой домен
Dox — доксициклин
EGF - эпидермальный фактор роста
gag - group-specific antigen, ген, кодирующий структурные белки ВИЧ GAPDH — глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа GCV - ганцикловир
HSV-tk —_тимидипкиназа вируса простого герпеса IISV-VP16 — вирусный белок 16 вируса простого герпеса hTERT — обратная транскриптаза теломеразы человека hTR - PIIK-субъединица теломеразы человека IgG - иммуноглобулин G
EGFP — зелёный флуоресцентный белок с улучшенными свойствами
NF-АТ — ядерный фактор активированных Т-клеток
NF-кВ — ядерный фактор кВ
NRE - район негативной регуляции генов ВИЧ
pol — polymerase, ген, кодирующий ферменты ВИЧ
PR_HIV — протеиназа ВИЧ
PSA - простатоспецифический антиген
P-TEFb — позитивный фактор элонгации транскрипции b
Saq - саквинавир
SV40 - обезьяний вирус
TAR - район трансактивации промотора ВИЧ
Taq ДНК-полимераза - термостабильная ДНК-полимераза Thermus aquaticus
TAF-TBP-ассоциированный фактор
Tat -_трансактиватор транскрипции генов ВИЧ
ТВР - ТАТА-бокс связывающий белок
ТС — транскрипционный комплекс
I . I ,u.i 1 сичи H! I

Эндонуклеазы рестрикции StuI, Asel, NruI - New England BioLabs, США T4 ДНК лигаза, фрагмент Кленова ДНК-полимеразы I E. coli, SAP (щелочная фосфатаза креветки) - МВІ Fermentas, Литва Трипсин с ЭДТА - Invitrogen, США
3.1.3 Антитела
Мышиные моноклональные к GAPDH (SC-47724), козлиные поликлональные к HSV-tk (SC-28038) и к tat (SC-17439); конъюгированными с нероксидазой хрена антитела осла к козлиным IgG (SC-2304) и антитела козы к мышиным IgG (SC-2302) - Santa Cruz Biotechnology, США.
3.1.4 Растворы
Буфер для ПНР реакции (10х) с Tag ДНК-полимеразой (ИБХ РАН): 166 мМ сульфата аммония, 670 мМ Tris-HCl, pH 8.8, 0.1% Tween-
Буфер для ПНР реакции (10х) с ДНК-полимеразой Advantage 2: 400 мМ Трицин -КОН (pH 8,7 при 25 °С), 150 мМ КОАс, 35 мМ Mg(OAc)2, 37,5 мкг/мл БСА, 0,05% Tween-20, 0,05%Nonidet-P40 (октилфеноксиполиэтоксиэтанол)
Буфер для нанесения ДНК на гель-электрофорез в агарозе (6x1: 0.25% бромфеноловый синий, 0,25% ксиленцианол, 30% глицерин
Буфер для нанесения олигонуклеотидов при электрофорезе в ПААГ: 0,03% бромфеноловый синий, 0,03% ксиленцианол, 95% формамид Буфер ТАЕ: 40 мМ Трис-ацетат pH 8,2, 1 мМ ЭДТА Буфер TBExl: 90 мМ Трис-борат pH 8,3, 1 мМ ЭДТА Буфер ТЕ. pH 8.0: 10 мМ Трис-НС1 pH 8,0, 1 мМ ЭДТА
PBS буфер (phosphate buffered saline): 1,7 мМ КН2РО4, 5,2 мМ NalbPO/j, 150 мМ

Буфер для денатурирующего электрофореза по Лэммли: 25 мМ Трис, 250 мМ глицин, 0,1% SDS
Буфер для переноса при проведении Вестерн-блот анализа: 25 мМ Трис, 192 мМ глицин, 20% метанол
Раствор для приготовления полиакриламидного геля для очистки олигонуклеотидов: 19% акриламид, 1% метиленбисакриламид, 7М мочевина, ТВЕ
іJ к д ч.ч! ' *■' ' її ч»;