Экспрессия фрагментов опухоле-ассоциированного гена муцина 1 мышей и изучение иммуногенной активности этих фрагментов

• Автор: Мушенкова, Наталия Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.03, 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВСТУПЛЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Распознавание опухоли

1.2. Система иммунного контроля роста опухоли.

1.3. Индукция толерантности к опухольассоциированным

антигенам.

1.4. Стратегии иммунотерапии рака.

1.5. Мышиные модели для изучения противоопухолевого иммунитета

1.6. Превентивные противоопухолевые вакцины.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
ГЛАВА 3. ПОЛУЧЕНИЕ МиС1 АНТИГЕНОВ.
ЗЛ. Клонирования тис4 и тис6 амплифицированных
фрагментов муцина 1.
3.2 Экспрессия фрагментов муцина 1 в Е.соИ
ГЛАВА 4. ИНДУКЦИЯ ГУМОРАЛЬНОГО И КЛЕТОЧНОГО ОТВЕТА НА МУЦИН 1 С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНКИММУНИЗАЦИИ
4.1. Анализ экспрессии гена МС1 в эпителии молочных желез и аденокарциномах молочных желез мышей
4.2. Анализ гуморального ответа на иммунизацию ДНК, ДНКбелок
4.3. Индукция клеточного иммунного ответа на МиС1.
ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ЭФФЕКТА ИММУНИЗАЦИИ МУЦИНОМ 1 В ТРАНСПЛАНТИРУЕМОЙ МОДЕЛИ АДЕНОКАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ МЫШЕЙ
5.1. Модели рака молочных желез
5.2. Влияние иммунизации вакцинами на основе муцина на рост
опухолей и выживание мышей.
ГЛАВА 6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ ДИК ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ МУЦИНА 1 В СПОНТАННОЙ МОДЕЛИ РАКА МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ У МЫШЕЙ.
6.1. Спонтанная модель аденокарциномы молочных желез.
6.2. Влияние иммунизации муцином на рост опухолей и выживание мышей в спонтанной модели
6.3. Влияние иммунизации на экспрессию муцина 1
6.4. Анализ гуморального ответа на муцин 1.
6.5. Анализ клеточного ответа на муцин 1.
6.6. Инфильтрация опухолей лимфоцитами.
6.7. Признаки аутоиммунных процессов.
ОБСУЖДЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ПРИЛОЖЕНИЕ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В процессе опухолевой прогрессии происходит разрушение тканевых барьеров с инвазией в окружающие ткани, а также массированная некротическая гибель клеток. Важным последствием нарушения тканевой архитектуры является локальная генерация провоспалительных сигналов в виде цитокинов и хемокинов 5, центральных инициаторов активации врожденной иммунной системы. Развитие воспаления приводит к активации врожденных компонентов иммунной системы и вовлечению в противоопухолевый ответ антигенспецифичных клеток адаптивного иммунитета. Молекулярной чертой канцерогенеза является генетическая нестабильность 6, означающая нестабильность антигенного профиля опухолевых клеток. Вследствие мутационных изменений новые антигены постоянно возникают в процессе эволюции опухолевых клеток. В клетках, выделенных из одной опухоли, может быть выявлено до 0 мутаций 7. Кроме того, за счет эпигенетических изменений деметилирования промоторных областей генов происходит гиперэкспрессия нормальных тканевых антигенов, многократно повышающая концентрацию белков, тем самым повышая их антигенность 5. РНК, изменения посттрансляционной модификации белков, экспрессии вирусных генов. Это создает возможность антигенспсцифического распознавания опухолевых клеток. Описано несколько классов опухольассоциированных О А А антигенов. Опухолеспецифические трансплантационные антигены ТБ ТА. Существование этого класса антигенов было обнаружено при постановке трансплантационных тестов. Когда опухоль пересаживали животному, предварительно иммунизированному инактивированными клетками той же опухоли, трансплант отторгался 8. Резистентность к пересаженной опухоли, была опосредована, как было установлено позднее, клетками иммунной системы, распознающими ОАА. Антигены, определенные в трансплантационных тестах, не экспрессируются на нормальных клетках и обнаруживаются в большинстве опухолей, индуцированных химическими канцерогенами. Антигены этой группы экспрессируются в нормальных тканях только в процессе дифференцировки и постоянно гиперэксперссированы в опухолевых клетках. Описан ряд тканеспецифических антигенов, свойственных меланоцитам Мс1ап А, , ТЯР1, тирозиназа 9. В клеточные лимфомы, моноклональные опухоли, происходящие из В лимфоцитов, экспрессируют идиотипические иммуноглобулины, антигенной специфичности, характерной для первоначальной трансформированной клетки. Они являются примером дифференцировочных антигенов уникальных для каждой индивидуальной опухоли. Одной из возможных проблем иммунизации с использованием дифференцировочных антигенов и антигенов, появляющихся в результате гиперэксперссии, является развитие аутоиммунных реакций в результате распознавания и элиминации нормальных клеток, экспрессирующих антиген. Действительно, показано, что в случае успешной иммунизации против меланомных антигенов, может развиваться витилиго потеря окраски кожных покровов в результате гибели нормальных мелаыоцитов . Антигены этой группы экспрессируются в эмбриональных тканях, но в низких количествах могут присутствовать и в нормальных тканях взрослого организма семенниках. К ним относится афстопротеин, продуцируемый клетками гепатонкарциномы, карциноэмбриональный антиген СЕЛ, встречающийся при различных формах рака прямой кишки, молочной железы, легких, антигены семейств Л, В, С, детектирующиеся в меланом, раков молочной железы, случаев рака пищевода . Активация в раковых клетках происходит в результате деметилирования промотерных областей генов 9. антигены считаются строго опухольспецифическими, поскольку клетки семенников не экспрессируют МНС I класса и не могут представлять эпитопы . Антигены этой группы широко используются в имму i ютсрапии. Высокий уровень генетической нестабильности раковых клеток является причиной постоянного возникновения новых антигенов в результате как точечных мутаций, так и крупных хромосомных перестроек делеций, транслокаций. Возможно появление новых белковых продуктов в результате слияния различных генов, появление новых рамок считывания, кодирующих не свойственные нормальным тканям белки.