Физико-химические механизмы действия на тромбоциты хлораминовых производных биогенных соединений и гипохлорита натрия

• Автор: Мурина, Марина Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 226 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Физикохимические свойства продуктов реакции, катализируемой миелопсроксидазой гипохлорига и хлораминовых производных аминокислот .

2. Структура и функции тромбоцитов.

2.1. Строение тромбоцитов

2.2. Механизм активации, агрегация и секреция тромбоцитов

2.3. Система трансдукц и сигнала в тромбоцитах.

2.4. Роль тромбоцитов в патогенезе сосудистых заболеваний и

противотромбопитарные препараты .

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ .
1. Реактивы
1.1.1 олучение хлораминовых производных аминокислот и гаурина
2. Объекты исследования
2.1.1 олучение образцов тромбоцитов кролика.
2.2. Приготовление образцов тромбоцитов человека.
2.3. Выделение мононуклеарных клеток, нейгрофилов и суммарной фракции лейкоцитов.
2.4. Выделение эритроцитов.
3. Методы исследования.
3.1. Регистрация агре ации тромбоцитов и лейкоцитов
3.2. Регистрация дезагрегации тромбоцитов
3.3. Регистрация изменения формы тромбоцитов.
3.4. Регистрация продуктов пероксидации липидов
3.5. Исследование реакции выброса цитоплазматических
гранул и транспорта в гранулярный аппарат в тромбоцитах
3.6. Флуориметрическое определение модификации аминогрупп .
3.7. Спсктрофотометрическое определение сульфгидрильных групп
3.8. Регистрация агрегации эритроцитов .
3.9. Кинет ический гемолиз эритроцитов
3 УФоблучение исследуемых образцов
3 Статистическая обработка полученных результатов.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Действие гипохлорита натрия на функциональную
активность тромбоцитов.
1.1 .Действие гипохлорита натрия на изолированные тромбоциты
1.2. Действие гипохлорита на тромбоциты в составе обогащенной тромбоцитами плазмы
1.3.Прямое и косвенное действие гипохлорита натрия на тромбоциты в составе обогащенной тромбоцитами плазмы.
1.4. Восстановление плазмой и сс компанентами агрегации тромбоцитов, модифицированных гипохлоритом натрия .
1.5. Влияние компонентов плазмы, модифицированных гипохлоритом натрия, на агрегацию нативных тромбоцитов
ГЛАВА 2. Действие хлораминовых производных биогенных соединений на различные функциональные процессы в тромбоцитах
2.1. Прогивотромбоцитарное действие хлораминовых производных аминокислот и таурина
2.2. Действие хлораминокислот на АДФиндуцированную агрегацию тромбоцитов в присутствии серосодержащих соединений
2.3. Влияние Ыхлораминокислот на изменение формы тромбоцитов .
2.4. Влияние Ыхлораминокислот на транспорт, приводящий к накоплению акридинового оранжевого в гранулярном аппарате тромбоцитов.
2.5. Зависимость противоагрегационного действия Ыхлораминокислот
от состояния тромбоцитов кролика
ГЛАВА 3. Ингибирование агрегации тромбоцитов в зависимости
от физикохимических свойств хлораминовых производных
аминокислот
3.1. Концентрационная зависимость антиагрст анионного действия Ыхлораминокислог на тромбоциты
3.2. Зависимость ингибирования агрегации тромбоцитов в составе обогащенной тромбоцитами плазмы от молекулярной массы
Ыхлораминокислот
3.3. Зависимость антиагрегационного действия Ыхлораминокислот от положения в молекуле хлораминовой группы
3.4. Ингибирование хл орам и но к и слота м и агрегации тромбоцитов в составе цельной крови в зависимости от
молекулярной массы.
ГЛАВА 4. Взаимодействие гипохлорита натрия и хлораминовых соединений с биологически важными веществами и компонентами тромбоцитов .
4.1. Исследование относительных констант скорости
взаимодействия гипохлорита натрия с аминокислотами и пептидами
4.2.Сравнительная эффективность взаимодействия ГШдихлортаурина с различными серосодержащими группами .
4.3. Стехиометрия взаимодействия гипохлорита натрия
к М.Мдихлоргаурина с серосодержащими соединениями .
4.4. Модификация сульфгидрильных и аминогрупп тромбоцитов при изменении их агрегациоиной активности гипохлоритом и хлораминовыми соединениями
4.5. Особенности ингибирования начальной агрегации тромбоцитов исследуемыми соединениями при действии
разных агонистов
ГЛАВА 5 . Действие Ы,Мдихлоргаурина на тромбоциты.
5.1. Получение твердого стабильного препарата ,1 ди хл ортау р и на
5.2. ii анионное действие хлораминовых производных таурина и аминокислот на нативные и предстимулированные тромбоциты человека
5.3. Подавление хлораминовыми производными аминокислот и таурина секреции АТФ в тромбоцитах человека
5.4. Действие Ы,Ыдихлортаурина на циклооксигеназную пероксидацию и агрегацию изолированных тромбоцитов .
5.5. Ингибирование начальной агрег ации и дезагрегация тромбоцитов человека при действии .дихлортаурина
5.6. Сравнительная оценка эффективности противотромбоцитарного действия аспирина, тиклопидина и .дихлортаурина
5.7. Антиагрегационное действие .дихлортаурина i viv на тромбоциты кролика .
ГЛАВА 6. Действие хлораминовых производных биогенных соединений и гипохлорита натрия на эритроциты и лейкоциты
6.1. Гемолиз и агрегация эритроцитов при действии хлораминокислот.
6.2. Действие гипохлорита натрия и .дихлортаурина на лейкоциты
6.3. Избирательность действия хлораминовых соединений при их
введении в кровь и обогащенную тромбоцитами плазму.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Модификация под действием гипохлорита белковых и липидных, углеводородных компонентов клеточных мембран и цитоплазмы лежит в основе нарушения мембранной проницаемости, угнетения и инактивации различных ферментных систем, нарушения обмена веществ в клетке 6,, . Интересны данные о действии 1I на компоненты крови. Показано , что инкубация гипохлорита с липопротеинами низкой плотности ЛИП приводит к пероксидации последних. В го же время, модифицированные гинохлоритом ЛИП вызывают активацию моноцитов и нейтрофилов. ПОЛ. Окислительная модификация липопротеинов приводит к нарушению их холестеринтранспортной функции окисленные ЛНП эффективнее транспортируют холестерин в клетки как содержащие, гак и не содержащие специфические рецепторы к ЛП. Предполагается, что инициирование ПОЛ в присутствии гипохлорита может быть реализовано благодаря его реакции с органическими гидропсроксидами, протекающей с образованием свободнорадикальных вероятно алкоксильных радикалов эффективных инициаторов ПОЛ. Показана модификация под действием гипохлорита основных белков сыворотки альбумина, иммуноглобулина . Наблюдается инактивация ферментов наибольшей чувствительностью к гипохлориту отличалась глутатионпероксидаза, каталаза инактивировалась при более высоких концентрациях гипохлорита. В работах Шаронова Б. П. с соавт. И, . Установлено, что взаимодействие сывороточных белков с гипохлоритом является неспецифическим и приводит к деградации белков. Показано, что наиболее сильно деградируют церулоплазмин и трансферин. Предполагается, что среди белков сыворотки именно церулоплазмин нейтрализует повреждающее действие активных форм кислорода, секретируемых стимулированными нейтрофилами во внеклеточное пространство . Установлена способность НОС1ОСГ модифицировать клетки гипохлорит вызывает лизис эритроцитов 5, инактивацию нейтрофилов 8. К моменту начала работы в литературе отсутствовали данные, указывающие на возможность действия гипохлорита на тромбоциты. Лишь году в работе Пасг1 Р. Авторами выдвигалась гипотеза согласно которой тромбоциты, потребляя Н2О2. В последние время появились данные о том. Мхлортаурин может транспортироваться в макрофаги и другие клетки через собственный специфический рецептор 4. Предполагается, что Мхлортаурин сигнальная молекула нейтрофилов, которая снижает образование медиаторов воспаления макрофагами 0. Ег, альфафактора некроза опухоли за счег ингибирования процессов транскрипции и трансляции, тем самым защищая собственные ткани от повреждения 3, 6, 4, 5. Показано , что 1Мхлортаурин способен инг ибировать коллагеназу, причем этот эффект специфичен по отношению к Мхлортаурину, так как хлораминовые производные аланина и лейцина не обладают таким свойством. МХлортаурин и другие хлорамины являются также природными ингибиторами репарации ДНК 0, и используются в качестве маркеров вовлечения МПО в воспалительное повреждение тканей. Таким образом, гипохлорит натрия и хлораминовые соединения обладают широким спектром биологического действия. Возникает вопрос, возможно ли применение этих вещества с лечебными целями в клинике. Соединения хлора используются в медицинской практике, главным образом, благодаря их дезинфицирующему и бактерицидному действию . Проведены многочисленные клинические испытания гипохлорита натрия, в результате чего разработаны методические рекомендации по его использованию. Так, предлагается местное применение гинохлорита натрия в дерматологии, в оториноларингологии, в хирургии. Получено разрешение на клиническое использование гипохлорит натрия в концентрации 0, для инфузионмой детоксикации организма при эндо и экзотоксикозах II и III степени 1. В связи с тем, что гипохлорит натрия может использоваться в клинике, представляет интерес изучение действия гипохлорита на кровь, так как возможно его прямое и косвенное через образование хлораминовых соединений побочное действие на клетки крови. В работе изучали действие гипохлорита и хлораминовых соединений, в основном, на тромбоциты и, в меньшей степени, исследовали его действие на лейкоциты и эритроциты. Поэтому подробнее остановимся на некоторых морфологических и функциональных особенностях тромбоцитов.