Роль фосфорилирования в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов

• Автор: Габдулхакова, Аида Габрахмановна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 110 с. : ил.

Введение.

Глава 1. Литературный обзор

Мейтрофил и его функция в организме.

1.1.1. Основные реакции нейтрофила.

1.1.2. Хемотаксические агенты

1.1.3. Рецепторы нейтрофилов

1.1.4. Различные состояния нейтрофилов в организме покой,

праймирование, активация и гиперактивация.

. 1.5. Изменение функций нейтрофила при патологиях.

1.2 Молекулярные основы респираторного взрыва

1.2.1. Компоненты ИАОРН оксидазы, образование активных форм кислорода

1.2.2. Цитохром в
1.2.3. Цитозольные факторыррЬох ирбГЬох.
1.2.4. Сбелки, входящие в состав ХАОРН оксидазы
1.3. Активация респираторного взрыва нейтрофилов хемотаксическим пептидом ФМЛФ.
1.3.1. Классическая последовательность передачи сигнала
1.3.2. Роль фосфорилирования в передача сигнала.
1.4. Праймирование респираторного взрыва физиологическими агентами
1.4.1. Рецепторы исследуемых праймирующих агентов.
1.4.2. Механизмы праймирования
Глава 2. Материалы н методы исследования
2.1. Материалы.
2.2. Биологический объект
2.3. Регистрация хемилюминесценции.
2.4. Специфическое связывание инсулина
2.5. Измерение 1Сацит.
2.6. Обработка результатов.
Глава 3. Результаты исследований.
3.1. Активация и праймирование респираторного взрыва нейтрофилов, вызванного хемотаксическим пептидом ФМЛФ
3.1.1. Праймирование респираторного взрыва нейтрофилов, активируемого ФМЛФ, через рецепторы разного типа.
3.1.2. Специфичность связывания 1инсулина.
3.2. Определение условий для наблюдения усиленного респираторного взрыва нейтрофилов, вызванного ФМЛФ.
3.2.1. Зависимость модулирующего действия праймирующих агентов от температуры пре инкубации.
3.2.2. Зависимость модулируюгцего эффекта праймирующих агентов от времени преинкубации
3.2.3. Роль генотипа и фенотипа в праймировании респираторного взрыва нейтрофилов
3.2.4. Концентрационные зависимости праймирующего эффекта инсулина.
3.3. Сравнительный анализ действия ингибиторов на респираторный взрыв нейтрофилов вызванный ФМЛФ
3.3.1. Действие ингибиторов на респираторный взрыв
нейтрофилов, вызванный ФМЛФ в низких концентрациях.
3.3.2. Особенности действие ингибиторов на респираторный взрыв нейтрофилов, вызванный ФМЛФ в высокой концентрации. 3.4 Механизмы праймшрования респираторного взрыва нейтрофилов
3.4.1. Исследование роли Сацит
3.4.2. Роль синтеза белка v в праймировании респираторного взрыва нейтрофилов
3.5. Сравнительный анализ действия ингибиторов на вызванный ФМЛФ респираторный взрыв нейтрофилов при праймировании инсулином, липополисахаридом и ФМЛФ
3.5.1. Праймирование респираторного взрыва нейтрофилов инсулином роль тирозиновых киназ и фосфатаз.
3.5.2. Роль цитоскелета в прагшировании
3.5.3. Исследование роли тирозиновых киназ и фосфатаз в праймировании липополисахаридом
3.5.4. Роль тирозиновых киназ и фосфатаз в праймировапия респираторного взрыва нейтрофилов ФМЛФ в
подпороговой концентрации
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Роль фосфорилирования в активации респираторного взрыва
4.2. Роль фосфорилирования в праймировании.
4.3. Вариабельность праймировапия респираторного
взрыва.
4.4. Дивергенция и перекрестное взаимодействие путей
активации ФМЛФ и праймирующих агентов
Выводы.
Список литературы


Праймирующий стимул вызывает метаболическую перестройку, не приводящую к активации клетки, следствием его влияния является усиление ответа на последующую активацию. Представление о механизме прайм ирования респираторного взрыва нейтрофилов в настоящее время находится в стадии формирования. М.В. Авторы рассматривают каждый механизм как самодостаточный для реализации праймирования. Мы предполагаем, что прайм ирование реализуется в результате перекрестного взаимодействии сигнальных путей, задействованных в праймировании и активации 1I оксидазы. Предположе1ше о перекрестном взаимодействии тирозиновото и сериитреонинового фосфорилирования при праймировании ресиирагорпого взрыва нейтрофилов кажется нам наиболее привлекательным М. В., . В пользу этого механизма говорит то. К, , ii . Са2щгг 3 процессы синтеза белка, экспрессии плазматических мембранных рецепторов и модуляции активности фосфолипаз, вероятнее всего, являются вторичными событиями по отношению к фосфорилированию. Ввиду сложности регуляции функций нейтрофила интересны причины возникновения нарушений в его регуляции при развитии патологий, когда избыточные дегрануляция и продукция активных форм кислорода ведут к поражению тканей и углублению патологического процесса В последнее время появляется все больше работ с комплексным подходом к исследованию праймирования респираторного взрыва нейтрофилов. Изучение эффектов физиологических медиаторов на функционирование нейтрофилов, в частности, инсулина, это малоисследованная область, связанная с актуальной проблемой дисфункции нейтрофилов при патологиях. Цель и основные задачи исследовании. Цель работы заключалась в исследовании взаимодействия сигнальных путей, участвующих в опосредованных рецепторами активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов, и роль фосфорилироваиия в этих процессах. ФМЛФ. Научная новизна. Впервые установлена связь гетерогенности физиологического ответа нейтрофилов с дивергенцией и перекрестным взаимодействием сигнальных путей. Впервые показана генетическая детерминированность реакции нейтрофилов на праймироваиие. Показана роль тирозиновых киназ и фосфатаз, обнаружено, что тирозиновые киназы и фосфатазы участвуют в активации респираторного взрыва хемотаксическим пептидом и его модуляции инсулином, липополисахаридом и ФМЛФ в низкой концентрации. Научнопрактическая ценность. Результаты работы вносят существенный вклад в понимание вопроса о вариабельности действия модулирующих факторов на функциональный ответ нейтрофилов. В методическом плане полученные результаты дают возможность оптимального выбора условий для наблюдения эффектов лраймирующих агентов. Апробация работы. Дания, i ii i США, i США, международной летней школе i i i Г реция. Публикации. По материалам диссертации опубликовано печатных работ, из них 4 статьи 1 статья в печати. Список сокращении. ГТФазу ivi i 3, I8 интерлейкины фактор некроза опухолей i , Ркиназа фосфатидилинозитол3киназа, I3 инозитол 1,4. ФАТ фактор активации тромбоцитов, ФМА форбол миристат ацетат ФЛС, ФЛА2, ФЛО фосфолипазы АЦ аденил атциклаза. Глава 1. Нейтрофильные гранулоциты нейтрофилы это подвижные короткоживущие клетки, циркулирующие в кровяном русле. Они представляют гетерогенную популяцию клеток, различающихся по ряду параметров. Характерным признаком нейтрофил ов является сегментированное ядро и наличие нейтральных гранул в цитоплазме Яновский Д. Н., Чепелева М. Л., . Нейтрофилы обеспечивают наиболее быстрые защитные реакции организма от повреждающих агентов. Они пассивно циркулируют в крови и бистро подходят к инфицированной ткани, где уничтожают патогены. Как и другие лейкоциты, нейтрофилы включаются в реакцию тревоги с помощью хемотаксических молекул, которые появляются в пораженной ткани, направляют миграцию клеток через стенки местных капиллярных сосудов и вызывают их накоплеггие в поврежденном органе Маянекий А. Н., Маянский Д. Н., . На хемоаттрактанты нейтрофилы могут отвечать различными реакциями. Изменение формы является следствием активации двигательного аппарата.