Исследование влияния ультрафиолетового излучения диапазона С (254 нм) на апоптоз иммунокомпетентных клеток

• Автор: Долгачева, Наталия Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 93 с.

1.1. Тклетки.

1.2. Вклетки.

1.3. Нейтрофилы.

II. Апоптоз в иммунной системе.

2.1. Система гибели .

2.2. Белки, ингибирующие каспазу 8 I.

2.3. Передача сигналов посредством других рецепторов смерти.

2.4. Апоптоз тимоцитов.

2.5. Удаление периферических Тклеток посредством апоптоза.

2.6. Костимуляция и выживание Тклеток

2.7. Гибель Влимфоцитов.

2.8. Апоптоз нейтрофилов.
III. Влияние взаимодействия между АПК, Тклетками и Вклетками на апоптоз.
3.1. Апоптоз и деление клеток.
3.2. Столкновение сигналов к делению клегок и к задержке роста запускает апоптоз.
3.3. Регуляторы перехода 1 играют решающую роль в контроле гибели клеток.
3.4. Многие рецепторы цитокинов запускают деление клеток и блокируют апоптоз.
3.5. может запускать апоптоз или передавать сигналы пролиферации клеток.
3.6. Регуляторы транскрипции являются решающими для деления клеток, выживания и гибели.
3.7. Белки семейства Вс замедляют выход клеток в клеточный цикл.
3.8. Семейство белков ингибиторов апоптоза одни представители подавляют апоптоз, другие регулируют клеточный цикл.
3.9. Роль митогеном активируемых киназ в аноптозе.
IV. Действие УФлучей на биологические системы.
4.1. Повреждение и репарация ДНК.
4.2. Действие УФоблучения на мембранные структуры.
Заключение.
МАТЕРИАЛЫ
Использовавшиеся в экпериментч реагенты.
Клетки.
Тимоциты крыс.
Лимфоциты и нейтрофилы периферической крови человека Ультрафиолетовое облучение клеток.
Гаммаоблучение клеток.
Расчт количества квантов, падающих на клетки при УФСоблучении.
МЕТОДЫ ИЗМЕРЕНИЙ.
Изменения в плазматической мембране аиоптозных клеток. Измерение содержания ДНК.
Тимоциты крыс.
Лимфоциты периферической крови человека.
Нейтрофилы периферической крови человека.
Морфологический контроль.
Измерения концентрации внутриклеточного кальция.
1. Проточный флуориметр ЛАКС1.
2. Спектрофлуориметр СФР1.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
1. Изучение механизма индукции и подавления апоптоза тимоцитов крысы ультрафиолетовым облучением.
1.1. Значение тирозинового фосфорилирования белков в индуцированном УФС апоптозе тимоцитов.
1.2. Изучение роли внутриклеточного Са
1.3. Роль фосфолипазы Аг, циклооксигеназы и липоксигеназы.
1.4. Исследование влияния мембранных и цитоплазматических антиоксидантов на вызываемый УФС апоптоз тимоцитов крысы.
2. Влияние УФС 4 нм на апоптоз и пролиферацию лимфоцитов
периферичесой крови человека.
2.1. Влияние облучения УФС на апогггоз лимфоцитов, , стимулированных ФГА
2.2. Влияние облучения УФС на апоптоз нестимулированных лимфоцитов.
3. Изучение влияния УФС на апоптоз нейтрофилов периферической крови.
3.1. Зависимость гибели нейтрофилов от дозы облучения УФС.
3.2. Влияние липополисахарида ЕсоН на апоптоз нейтрофилов, облучнных УФС.
3.3.1. Влияние ионизирующего излучения на апоптоз нейтрофилов.
3.3.2. Влияние ЛПС ЕсоП на апоптоз нейтрофилов, индуцируемый гаммаизлучением.
3.4. Влияние иинка на апоптоз нейтрофилов при облучении УФС. Выводы.
Список литературы


Данная работа является продолжением исследований молекулярных механизмов действия УФС 4 нм на иммуннокомпетентные клетки, которые ведутся в лаборатории структурного и функционального анализа клеток ИБК РАН. Отправной точкой исследования послужили данные о возможности индукции и подавления апоптоза тимоцитов крысы ультрафиолетовым облучением Донская и др. Целью работы было изучение механизмов влияния УФС на апоптоз иммуннокомпетентных клеток. УФС на апоптоз нейтрофилов периферической крови человека. В настоящей работе проведено исследование молекулярного механизма влияния УФС на апоптоз тимоцитов крысы. С использованием антиоксидантов показано, что окислительный стресс играет ключевую роль в развитии апоптоза в тимоцитах крыс при ультрафиолетовом облучении. Впервые проведены исследования влияния УФС 4 нм на пролиферацию и апоптоз лимфоцитов периферической крови при стимуляции фитогемагглютинином. Показано, что облучение УФС 4 нм вызывает, вопервых, задержку продвижения клеток по клеточному циклу, вовторых, увеличение процента апоптозных клеток. Предложен возможный механизм влияния УФС на пролиферацию и апоптоз лимфоцитов периферической крови. Впервые проведено исследование влияния ультрафиолета С 4 нм на апоптоз нейтрофилов человека i vi. Показано, что УФС 4 нм дозозависимо ускоряет апоптоз нейтрофилов. Проведено исследование влияния липополисахарида . УФС 4 нм. Показано ингибирующее влияние прединкубации с липополисахаридом . УФС на апоптоз нейтрофилов. Показан ингибирующий эффект цинка в микромолярных концентрациях на индуцированный УФС
апоптоз нейтрофилов. Показало изменение экспрессии рсцептора нейтрофилами при облучении УФС. Предложен возможный механизм действия облучения УФС т vi на апоптоз нейтрофилов периферической крови человека. Результаты работы вносят существенный вклад в изучение механизмов терапевтического действия УФС 4 нм, в частности, влияния УФС 4 нм на иммуннокомпетентные клетки. Разработанная экспериментальная модель зависимости гибели нейтрофилов периферической крови человека от дозы УФС облучения может быть использована для изучения влияния различных факторов и препаратов на реализацию процесса апоптоза в постмитотических клетках. Диссертационная работа начинается обзором литературных данных. Поскольку исследованию апоптоза, вызванного в различных типах клеток разнообразными воздействиями, посвящены многие сотни научных публикаций, приведенный здесь обзор включает только те вопросы, которые так или иначе затронуты в работе. Основные результаты, полученные автором, сформулированы в выводах. Обзор литературы. I. Клетки иммунной системы. Иммунная система представляет собой совокупность взаимодействующих клеток Т и В лимфоцитов, натуральных киллеров , лейкоцитов, в том числе нейтрофилов, макрофагов и профессиональных антигснпрезентирующих клеток АГ1С и их разнообразных подклассов. Большинство клеточных компонентов иммунной системы происходят из костного мозга. Влимфоциты, . Тлимфоциты созревают в костном мозге и тимусе Пути развития Т и В лимфоцитов имеют немало общих черт, но и много отличий. Тклетки. ПреТ лимфоциты мигрируют из костного мозга в тимус. В тимусе они созревают, проходя позитивный или негативный отбор в зависимости от сродства их Тклеточных антигенных рецепторов i ТКР к антигенам собственного главного комплекса гистосовместимости iiii x МНС. Они помещают эти пептиды на поверхности клеток для распознавания Тклетками процесс называется i i представление антигена. Большинство пептидов, представленных в тимусе, являются производными собственных белков. Гклетки, которые имеют высокое сродство к молекулам собственного МНС и пептидам, удаляются для обеспечения толерантности к нормальным жидкостям организма и предотвращения аутоиммуннитета. Гклетки, взаимодействующие с молекулами го класса МНС, становятся клетками, экспрессирующими СД4 СД4рецептор, а клетки взаимодействующие с молекулами Iго класса гистосовместимости становятся Тлимфоцитами, несущими маркер СД8 СД8. В циркуляцию из тимуса выходят лишь 0, клеток, остальные гибнут в вилочковой железе или сразу после выхода из нее.