Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей хемилюминесцентным методом

• Автор: Любицкий, Олег Борисович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Сокращения и условные обозначения
Общая характеристика работы
Актуальность исследования
Цель и задачи исследования
Научная новизна
Практическая значимость
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Свободнорадикальное повреждение при заболеваниях человека и современное состояние антиоксидантной терапии
1.2. Антиоксиданты биологических жидкостей организма человека
1.3. Модельные системы для определения антиоксидантной
активности биологических жидкостей
Глава 2. Материалы и методы исследования
2.1. Материалы
2.2. Препаративные методы
2.2.1. Получение плазмы крови
2.2.2. Получение гемолизата эритроцитов
2.2.3. Приготовление образцов плазмы крови с различной степенью гемолиза
2.2.4. Получение биологических жидкостей
2.3. Биохимические методы
2.3.1. Фракционирование плазмы крови
2.3.2. Определение концентрации мочевой кислоты в плазме крови
2.3.3. Получение общей фракции фосфолипидов из желтков куриных

2.3.4. Приготовление многослойных фосфолипидных липосом
2.4. Биофизические методы
2.4.1. Измерение хемилюминесценции
2.4.2. Модельная система гемоглобин-пероксид водорода-люминол

2.4.3. Модельная система окисления суспензии фосфолипидных липосом, индуцированного ионами двухвалентного железа
2.4.4. Измерение спектров флуоресценции люминола
2.5. Клиническая характеристика больных острым деструктивным панкреатитом
2.6. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты и их обсуждение
3.1. Модельная система гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.1.1. Кинетики хемилюминесценции и предполагаемая схема химических реакций в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.1.2. Подбор оптимального соотношения компонентов системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.2. Изучение антиоксидантных свойств веществ с помощью модельной системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.2.1. Влияние ингибиторов свободнорадикального окисления на параметры хемилюминесценции системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.2.2. Влияние ингибиторов свободнорадикального окисления на интенсивность флуоресценции люминола
3.2.3. Определение антиоксидантной активности веществ с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.3. Изучение антиоксидантных свойств биологических жидкостей с помощью модельной системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.3.1. Влияние плазмы крови на параметры хемилюминесценции системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.3.2. Влияние гемолиза на антиоксидантные свойства плазмы крови в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.3.3. Определение антиоксидантной активности плазмы крови с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол

3.3.4. Исследование изменения антиоксидантной активности плазмы крови человека в системе гемоглобин-пероксид врдорода-люминол
при остром деструктивном панкреатите
3.3.5. Изучение вклада мочевой кислоты в антиоксидантную
активность плазмы крови в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол
3.3.6. Исследование изменения антиоксидантной активности плазмы крови человека и кроликов в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол после однократного перорального приёма аскорбиновой кислоты
3.3.7. Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-
люминол
3.4. Преимущества и недостатки способа определения
антиоксидантной активности веществ и биологических жидкостей с помощью модельной системы гемоглобин-пероксид водорода-
ЛЮМИНОЛ
Выводы
Список использованной литературы

• дигидрокверцетин был любезно предоставлен кафедрой органической химии Московской медицинской академии им. И.М, Сеченова (зав. - д.х.н. профессор Тюкавкина H.A.);
• ликопин был любезно предоставлен лабораторией биотехнологии НИИ ФХМ (зав. - д.б.н., профессор Капитанов А.Б.).
Остальные реактивы были отечественного производства квалификации “ос.ч.”, “Х.Ч.”, “ч.д.а.”. Растворители перед применением подвергались перегонке и хранились в темных бутылях на холоду.
2.2. Препаративные методы
2.2.1. Получение плазмы крови
Забор крови осуществлялся, как правило, утром натощак путем пункции локтевой вены. Для получения плазмы венозную кровь количеством 10 мл собирали в центрифужную пробирку с антикоагулянтом (гепарин, 125 ЕА/мл). Затем образцы крови центрифугировали на центрифуге ОПН-3 при 900g в течение 10 мин. Полученную плазму крови осторожно отбирали в отдельные пробирки и хранили при +4°С в течении 6-8 ч либо в замороженном состоянии при -20°С не более суток.
2.2.2. Получение гемолизата эритроцитов
Эритроцитарную массу отделяли от плазмы крови и трижды промывали физиологическим раствором (1:10). С целью получения гемолизированных эритроцитов к одному объему эритроцитарной массы добавляли девять объемов бидистиллированной воды и тщательно перемешивали.
2.2.3. Приготовление образцов плазмы крови с различной степенью гемолиза. Образцы с различной степенью гемолиза готовили, добавляя к 100 мкл
плазмы крови от 4 до 50 мкл гемолизата эритроцитов и доводя общий объем фосфатным буфером до 1 мл. Оптические плотности полученных образцов (D) измеряли при 415 и 700 нм. Первая соответствует максимуму поглощения гемоглобина, а вторая обусловлена вкладом светорассеяния. Разность D415-D700