Изменение состава липидов эритроцитов голубя при индуцированном апоптозе

• Автор: Девяткин, Аркадий Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Саранск
• Количество страниц: 126 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА I. Молекулярные механизмы и биологическая роль аноптоза

1.1. Общие понятия и характеристика апоптоза

1.2 Молекулярные механизмы лежащие в основе аноптоза.

1.3 Участие липидов и липидной фазы мембран в апоптозе.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. Объект и методы исследования

2.1. Объект исследования и постановка опыта

2.2. Микроскопия эритроцитов голубя

2.3. Выделение фосфолиназы А2 из эритроцитов.
2.4. Определение активности фосфолипазы А2.
2.5. Количественное определение белка в ферментном преиаратс.
2.6. Определение содержания ТБКактивных веществ малонового
диальдегида в эритроцитах
2.7. Орсделение содержания диеновых конъюгатов.
2.8. Получение сфингомнелина.
2.9. Получение диацилглицерола.
2 Получение суспензий сфингомнелина, фосфатндилсерипа и диацилглицерола
2 Хроматографические методы анализа
21. Тонкослойная хроматография липидов.
21.1. Подготовка силикагеля и приготовление пластинок
21.2. Разделение липидов.
21.3. Разделение общих липидов
21.4. Обнаружение липидов при помощи йода
2.И. 1.5. Обнаружение фосфолипидов.
21.6. Определение микроколичеств фосфора липидов.
2 Газожидкосгнаявая хроматография. Анализ жирных кислот.
21. Метилирование жирных кислот
22. Техника хроматографического анализа жирных кислот
23. Обработка результатов хроматографических нсследованин
2 Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. Выброс клеточного ядра из эритроцитов голубя и состояние мембранных липидов при воздействии пероксидом водорода и УФоблучснием.
3.1. Пероксид водорода как индуктор апоптоза эритроцитов голубя. Влияние температуры
3.2. Индукция апоптоза эритроцитов голубя УФизлучеинм. Влияние температуры .
3.3. Влияние добавленного сфингомиелнна как индуктора апоптоза эри троцитов голубя
3.4. Влияние добавленного фосфатидплсерина и днацплглицерола как
индукторов апоптоза эритроцитов голубя.
3.5 Стеариновая и олеиновая кислоты как индукторы апоптоза эритроцитов голубя.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Изменения количественного и качественного соотношения липидов могут являться одним из механизмов апоптоза эритроцитов голубя. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. Апоптоз, или программируемая гибель клеток, представляет собой управляемый процесс самоуничтожения клеток. Он направлен на освобождение от старых или наработанных в избытке клеток, а так же от клеток с нарушением дифференцировки и повреждении генетического вещества. Обновление форменных элементов крови, в том числе, эритроцитов происходит весьма интенсивно и может запускаться также через изменение химического состава клетки качественного и количественного соотношения белков, липидов. Апоптоз в клетках является повсеместным и постоянно происходящим процессом. Клеточный обмен в тканях, иммунологические реакции, циклическая регрессия и возрастная инволюция некоторых тканей и органов далеко не полный перечень физиологических процессов, сопровождающихся апоптозом. Нарушение процессов клеточной гибели может приводить к возникновению патологических состояний и заболеваний, которым сопутствуют как дегенеративные, так и пролиферативные изменения. Повышенная активация апоптоза является звеном патогенеза СПИД, нейродегенеративных и миелодиспластических заболеваний, а также ишемических повреждений разных органов. Ингибирование клеточной гибели определяет опухолевые поражения различной природы, аутоиммунные и вирусные заболевания. Изучение апоптогенеза при данных патологических состояниях лежит в основе их целенаправленной коррекции. Поддержание структурного и функционального постоянства тканей и органов биологических систем определяются сбалансированностью процессов отмирания и обновления клеток. Существование различных механизмов вне и внутриклеточных, обеспечивающих данный биологический процесс, позволяет предположить существование возможности избирательной регуляции клеточной гибели. Первое гистологическое описание смерти клеток было опубликовано в г. Вирхова. Тогда она называлась дегенерацией, некрозом, умиранием и все эти обозначения считались синонимами гангрены. В дальнейшем понятия некроз и некробиоз, использовали для характеристики медленной смерти, или необратимого изменения тканей в живом организме. В настоящее время принято выделять следующие основные типы клеточной смерти апоптоз и некроз. В г. . . В данной работе говорилось о том, что этот особый механизм, возможно, и есть апоптоз, а элиминация клеточных осколков может осуществляться за счет, их поглощения соседними клетками. Существование клеточной смерти у эмбрионов известно с г. Глуксман . . Он отметил возможность распада ядра на несколько пикнотичсских гранул, в то время как изменения митохондрий в цитоплазме им обнаружены не были. Эта работа представляла собой первое детальное описание морфологии программированной клеточной гибели. Современное понятие апоптоза основывается па результатах биохимических и электронномикроскопических исследований. В наиболее четкой форме данные в пользу существования двух морфологически различных типов клеточной смерти апоптоза и некроза впервые приведены в работе Керра . . . Керр и соавторы систематизировали данные, касающиеся ультраструктурных изменений, происходящих в клетке во время сс физиологической гибели. Они предложили называть эти изменения, ведущие к уменьшению числа клеток и образованию мелких округлых цитоплазматических конгломератов, апоптозом. Электронная микроскопия позволила выявить, что конгломераты представляют собой окруженные мембраной фрагменты клеток, содержащие цитоплазму, хорошо сохранившиеся органеллы и иногда фрагменты 4 компактного хроматина. Это можно расценивать как свидетельство того, что апоптоз возник в биологической эволюции очень рано. Наличие двух типов клеточной гибели одновременно в одной ткани сформировавшегося организма свидетельствует о том, что между этими вариантами должны быть элементы сходства. К таким явлениям относятся изменения уровня содержания в клетках ионов кальция, оксидативный стресс и активация прогеаз . . .