Свойства Ca2+-канала, индуцированного ингибитором кальмодулина в клетках асцитной карциномы Эрлиха

• Автор: Касымов, Виталий Анварович
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 101 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1. Са2ТРАНСПОРТИРУЮЩИЕ СИСТЕМЫ КЛЕТКИ

. I. Механизмы входа Са2 в клетки

1.1.2. Истинные рецепторуправляемые каналы.

1.1.3. Са2л каналы, активируемые вторичными посредниками.

..белокуправляемые Са2 каналы.

1.1.5. Потенциачуправляемые кальциевые каначы.

2. Са2КАНАЛЫ ПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ МЕМБРАНЫ РЕГУЛИРУЕМЫЕ КАЛЬМОДУЛИНОМ.

2.1. Депоуправляемы й вход Са2.
2.2. Со2 каначы регулируемые арахидоновой кислотой.
2.3. Каначы регулруемы циклическими нуклеотидами.
2.4. рецепторы.
3. ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ Са2 КАНАЛЫ РЕГУЛИРУЕМЫЕ КАЛЬМОДУЛИНОМ.
3.1. Рианодиновые рецепторы.
3.2.1РЗ рецепторы.
4. Са2 НЕЗАВИСИМАЯ ФОСФОЛИПАЗА А2.
4.1. Ингибиторы i2
4.2. Механизмы регуляции активности i2.
4.3. Функции i2 во внутриклеточной сигнализации.
4.3.1. Вход кальция.
4.3.2.Секреция н ишемия сердца.
4.3.3. Апоптоз.
5. ВХОД Са2 В КЛЕТКИ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ИНГИБИТОРОВ КАЛЬМОДУЛИНА.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Получение клеток.
2.2. Измерение Ссi.
2.3. Измерение Са2 во внутриклеточных структурах.
2.4. Измерение скорости транспорта Мп2.
2.5. Описание экспериментальной установки.
2.6. Измерение цитозольного кальция ii при помощи лазерной сканирующей конфокальной микроскопии.
2.7. Измерение АТФ с использованиемлюциферинлюциферазнойреакции.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. 1 вызывает секрецию АТФ и транзитное повышение Са2 в клетках АКЭ.
3.3. СаI канат, индуцируемые 1, проницаемы для Мп2.
3.4. Ингибиторы 2капала, индуцированного 1.
3.5. Ингибиторы Со2независимых фосфолипаз А2 3 и подавляют вход Са2, активированный 1.
3.6. Температурная зависимость Са2каналов, индуцированных 1.
3.7. Взаимодействие 1 и ингибиторов входа Са2 с калъмодулином.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Таким образом, литературные данные указывают на участие ингибиторов кальмодулина в активации i2 и Мп2проводящих Са2каналов в ряде клеток. Са2 в ЭР , . Поскольку ингибиторы i2 подавляют вход Са2, то индуктором канала может быть лизофосфолипид, образующийся при активации i2. Подавление активности этой изоформы 2 приводит к ингибированию неселективных и Са2селективных каналов в гладкой мышце сосудов, тромбоцитах человека и Тлимфоцнтах i Т. Активация i2 приводит к открытию каналов двух типов Са2селективного и неселективного катионного канала v . ., . Природный активатор i2 не известен. Одним из претендентов на роль активатора является фактор входа Са2 i ix , I i Т. Ранее было показано, что арахидоновая кислота и ингибиторы сс окисления подавляют активированный вход Са2 в клетки v . ., . Действие 1 на клетки приводит к усилению продукции арахидоновой кислоты . ., . . . Таким образом, арахидоновая кислота может выступать в качестве ингибитора входа Са2, особенно при высоких концентрациях, которые достигаются в присутствии ингибитора ес окисления . Возможно также, что арахидоновая кислота в больших концентрациях угнетает активность самой 2 ингибирование продуктом. Эти два ингибирующих эффекта арахидоновой кислоты могли бы отвечать за подавление 1 индуцированного входа Са2. Исходя из вышесказанного цель настоящей работы заключалась в исследовании свойств нового Са2 капала индуцированного ингибиторами кальмодулина в клетках асцитной карциномы Эрлиха. Изучение механизмов активации и инактивации этого Са2канапа, индуцированного ингибиторами кальмодулина в плазматической мембране невозбудимых клеток. Поиск механизмов регуляции канала ионами Са , кальмодулином, продуктами Са2независимой фосфолипазы А2 и арахидоновой кислотой. Поиск специфических ингибиторов этого канала. ГЛАВА 1. Внутри клетки Са2 локализован как в специфических органеллах которые могут сохранять запасы Са2 , Т. 2 может свободно диффундировать из одного места в другое или распределен по Са2 депо V , С. i, . Изменения в концентрации ионов Са2т четко контролируется комплексом взаимодействий между ионными каналами, транспортерами, насосами и Са2 связывающими белкам, и в конечном итоге пространственно и временно, эти системы настроены на модулирование множества внутриклеточных функций. Для увеличения концентрации Са2 в цитоплазме, Са2 может, как высвобождаться из внутриклеточных депо обеспечивая кратковременное увеличение Са2 так и входить в клетку из внеклеточного пространства обеспечивая поддерживаемое увеличение Са. Эндоплазматический ретикулум хорошо известен своей ролью в запасании и выбросе Са2 при стимуляции агонистами i, . . , инициации Са2 зависимых путей клеточной смерти, а пополнение запасов Са2 после каждого выброса является важнейшим событием для функциональной целостности и выживания клетки. Большинство процессов, регулируемых Са2 контролируются внутриклеточными концентрациями Са2 в диапазоне 7 М, тогда как концентрация Са2 во внеклеточной среде намного выше около 3 М i . i, . С другой стороны, мембранный потенциал эукариотических клеток в покое составляет от до V внутри отрицательно. Таким образом, катионы, такие как Са2, будучи распределены согласно электрохимическому градиенту, должны присутствовать в цитоплазме в гораздо более высоких концентрациях, чем 7 М i . i, . Однако Са не распределен по потенциалу, а в клетках имеются механизмы, которые выводят ионы 2 наружу. Эукариотические клетки содержат системы транспорта Са2 в плазматической мембране, в митохондриях и в эидоплазматичсском рстикулуме i . i . Как правило, плазматическая мембрана содержит три системы Саканалы, специфичную АТФазу и 2 обменник i, , . Вход внеклеточного Са2 по градиенту концентрации осуществляется, в основном, по Са2каналам плазматической мембраны.