Исследование механизмов окислительно-восстановительного гомеостаза на примере системы "активированные нейтрофилы-пероксидное окисление липидов-антиоксиданты"

• Автор: Искусных, Анна Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 158 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Пероксидное окисление липидов и антиоксидантная

система организма человека.

1.1. Пероксидное окисление липидов в норме и

при развитии патологического процесса

1.2. Роль антиоксидантной системы и отдельных ее компонентов в защите организма от активных форм кислорода и продуктов

псроксидного окисления липидов.

ГЛАВА 2. Особенности функционального состояния нейтрофилов

в норме и при патологии

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования.
3.1. Объекты исследования
3.2. Выделение нейтрофилов из крови человека.
3.3. Определение качественного и количественного состава суспензии нейтрофильных лейкоцитов.
3.4. Определение функциональной активности нейтрофилов
методом люминол и люцигенинзависимой хемилюминесценции
3.5. Получение супернатанта нейтрофилов
3.6. Определение функциональной активности миелопероксидазы
3.7. Нагревание растворов пероксидазы
3.8. Облучение исследуемых образцов
3.9. Определение пероксидазной активности пероксидазы
3 Регистрация спектров поглощения растворов пероксидазы
3 Исследование гель хроматографических свойств пероксидазы.
3 Измерение буферной емкости и анализ кривых титрования
3 Определение каталазной активности пероксидазы
3 Определение оксидазной активности пероксидазы
3 Метод определения диеновых конъюгатов и кетодиенов полиненасыщенных жирных кислот в крови.
3 Метод определения восстановленного глутатиона в крови
3 Метод определения активности глутатиоипероксидазы в крови
3 Метод определения активности глутатионредуктазы в крови
3 Метод определения СОД активности крови
3 Метод определения каталазной активности крови
3 Статистическая обработка результатов экспериментов.
ГЛАВА 4. Влияние температуры и УФсвета на
структурнофункциональные свойства пероксидазы.
4.1. Влияние температуры и УФсвета на структурные свойства пероксидазы и проявление пероксидазной активности
4.2. Исследование влияния температуры и УФсвета на каталазную активность пероксидазы.
4.3. Оксидазная активность термомодифицированной пероксидазы.
ГЛАВА 5. Влияние УФоблучения на функциональную активность нейтрофилов крови доноров, содержание в ней продуктов пероксидного окисления липидов и состояние системы антиоксидантной защиты.
5.1. Влияние УФсвета на состояние системы антиоксидантной
защиты и уровень ПОЛ в крови доноров.
5. 2. Действие УФсвета на функциональную активность нейтрофилов
ГЛАВА 6. Влияние гистамина на функциональные свойства
нейтрофилов, уровень ПОЛ и состояние АОС в крови доноров.
6.1. Влияние гистамина на функциональные свойства
нейтрофилов крови доноров
6.2. Влияние гистамина на уровень ПОЛ и состояние АОС
в крови доноров.
ГЛАВА 7. Влияние УФсвета и кваматела на функциональные
свойства нейтрофилов, уровень ПОЛ и состояние антиоксидантной
системы крови больных панкреатитом.
7.1. Роль свободнорадикальных процессов в патогенезе
острого панкреатита
7.2. Влияние УФсвета на функциональную активность
нейтрофилов больных панкреатитом.
7. 3. Исследование влияния УФоблучения на показатели ПОЛАОС
в крови больных панкреатитом.
7.4. Применение кваматела для лечения язвенной болезни
двенадцатиперстной кишки и панкреатита.
7. 5. Влияние кваматела на функциональные свойства нейтрофилов в крови больных острым панкреатитом и ЯБ ДПК.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Список литературы содержит 4 источника, из них 6 отечественных и 8 зарубежных. ГЛАВА 1. Реакции пероксидного окисления липидов ПОЛ, имея универсальный характер, являются показателем устойчивости стационарного режима превращений в организме С. Г. Семесько, Фархутдинов, ii, и определяют возможность развития патологии . Татро, Это обусловлено высокой биологической активностью соединений, образующихся в реакциях ПОЛ, изменениями характера межклеточных и межсистемных взаимоотношений, комплексом, системных перестроек метаболизма, потенцируемых ими, а также решающей ролью в жизнедеятельности организма биомембран, в структуре которых важное место занимают липиды с высоким содержанием ненасыщенных жирных кислот. Пероксидное окисление липидов одно из. СРО в организме В. Е. Каган с соавт. Первичное инициирование свободных радикалов i viv происходит под действием как химических, так и физических факторов К. Свободные радикалы органических соединений образуются путем прямого воздействия ионизирующих и ультрафиолетового УФ излучений на эти молекулы, а также посредством их взаимодействия с радикальными продуктами радиолиза или фотолиза воды. Среди химических инициаторов ПОЛ в живых системах центральное место занимают активные формы кислорода АФК , , Н2, ОН В. И. Кулинский, В. К. . В.П. Скулачев, К. Двумя важнейшими системами генерации АФК являются электронтранспортная цепь ЭТЦ эндоплазматического ретикулума ЭПР и митохондрий. В ЭПР радикалы кислорода генерируются при активации цитохром Розависимых оксидоредуктаз и автоокислении самого цитохрома р0. В митохондриях образование продуктов восстановления кислорода прочно связано с активным центром цитохромоксидазы Л. Д Лукьянова с соавт. Т.Т. Березов, Б. Ф. Коровкин, . АФК продуцируются фагоцитами в ходе стимуляции неспецифической защиты организма А. Н. Маянский, Д. Н. Маянский, . Образование АФК наблюдается в реакциях с оксид азами, переносящими один или два электрона на С2 с образованием НАДФНоксидаза, ксантиноксидаза и Н2О2 ксантиноксидаза, флавиновые оксидазы Н. К. Зенков, Е. Б Меньшикова, . В нормальных условиях АФК выполняют сигнальную функцию Е. Е. Дубинина V. Viv, . I , I. V. i, Л i В. АР1 и др. При накоплении АФК в результате нарушения равновесия между их образованием и обезвреживанием в организме возникает окислительный стресс. Свои альтерирующие эффекты активные формы кислорода реализуют как путем прямого влияния на компоненты клеток и органелл i, К. ПОЛ В. Е. Каган с соавт. К.У. Ингольд, А. Х. Коган, А. П. Погромов, К. М. , , . Сущность цепного процесса окисления липидов состоит в чередовании двух основных реакций образования пероксидного радикала липида 2, а затем гидропероксида и нового радикала липида . Ю.А. Владимиров, А. И. Арчаков, . АФК способны индуцировать ПОЛ как в темновых процессах например, при фагоцитозе К. М , , , так и при воздействии УФсвета В. Г. Артюхов, М. А. Наквасина, . М. , . Процесс пероксидного фотоокисления липидов ПФОЛ является двухквантовым и протекает по сложному механизму. Первая фотохимическая стадия генерация гидропероксидов в результате присоединения кислорода вторая стадия, не зависящая от присутствия кислорода, фотолиз гидропероксидов до вторичных продуктов альдегидов и кетонов, поглощающих УФизлучение в диапазоне длин волн нм. При воздействии видимого и длинноволнового УФсвета процесс заканчивается в основном на стадии образования гидропероксидов, а при облучении липидных систем более коротковолновым УФсветом А3 нм накапливается большое количество вторичных продуктов В. Г. Артюхов, М. А. Наквасина, . УФО стимулирует 2 класса процессов ПОЛ в мембранах клеток крови Д. И. Рощупкин, М. Оба процесса эффективно подавляются антиоксидантами ловушками свободных радикалов. УФизлучение с длиной волны менее 0 нм сравнительно сильно поглощается гидропероксидами. В этом случае фотоокисление липидов может происходить благодаря фотохимическому разветвлению цепей окисления, несмотря на присутствие антиоксидантов. Прямой фотолиз антиоксидантов должен быть решающим фактором для развития фотоокисления липидов при.