Антигенная структура различных форм пероксидазы хрена

• Автор: Игнатенко, Ольга Витальевна
• Шифр специальности: 02.00.15, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 с.

СОДЕРЖАНИЕ.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ИММУННОГО РАСПОЗНАВАНИЯ

1.1. Краткая характеристика строения антител и их свойства

1.2. Антигенные детерминанты белков

1.3. Кинетические и термодинамические характеристики взаимодействия белка с антителом.

1.4. Моделирование механизма связывания антитела с антигеном.

Глава 2. КАРТИРОВАНИЕ АНТИГЕННЫХ ДЕТЕРМИНАНТ

2.1. Определение антигенных детерминант нативного белка на основании данных о структуре комплексов антигенантитело
2.2. Иммунологическое определение антигенных детерминант.
Глава 3. ОБЩИЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О СТРУКТУРЕ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА
3.1 Общая характеристика псроксидаз
3.2. Структура изофермента С пероксидазы хрена.
3.3. Иммунохимические свойства пероксидазы и других
гемсодержащих белков.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.
Глава 4. МА ТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
4.1. Реагенты и оборудование.
4.2. Методы исследований.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ИММУНОГЕННОСТИ ХОЛО, АПО
И РЕКОМБИНАНТНОЙ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА
Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ РАЗЛИЧНЫХ ФОРМ ПЕРОКСИДАЗЫ
6.1. Сравнительный анализ идентичности антигенных структур холо и апопероксидазы методом двойной иммунодиффузии в агаре по Ухтерлони
6.2. Исследование различий линейных антигешшх детерминантах холо и апопероксидазы методом РЕРЗСШ
6.3. Анализ расположения линейных антигенных детерминант холо и апопероксидазы в структуре молекулы.
Глава 7. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ДЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКИ АНТИГЕННЫХ СВОЙСТВ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА
7.1. Определение специфичности моноклональных антител методом конкурентного ИФА
7.2. Связывание моноклональных антител с различными псроксидазами и их модифицированными формами
7.3. Локализация линейных антигенных детерминант для моноклональных антител и анализ их пространственного расположения в структуре молекулы пероксидазы.
7.4. Определение констант комилексообразования моноклональных антител с нативной и рекомбинантной пероксидазой.
Глава 8. ВЛИЯНИЕ АНТИТЕЛ НА КАТАЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ И СТАБИЛЬНОСТЬ ПЕРОКСИДАЗЫ ХРЕНА
8.1. Влияние моноклональных антител на каталитическую активность различных форм пероксидазы хрена
8.2. Изучение стабильности нативной и рекомбинантной пероксидазы в комплексе с антителами
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


В результате межклеточной кооперации происходит кооперация Влимфоцитов и их трансформация в плазматические клетки, часть которых сскретирует в кровь аналогичные по специфичности рецепторам на поверхности Влимфоцитов антитела, а другая часть оставаясь в организме, реагирует на повторное введение антигена и синтезирует антитела против него. Антиген способен активировать сразу несколько типов Влимфоцитов, содержащих на своей поверхности рецепторы различной степени специфичности по отношению к нему. В результате образуется смесь антител различной специфичности. Такие антитела называют поликлональными. Состав поликлональной антисыворотки также усложняется тем, что в молекуле антигена могут присутствовать несколько антигенных детерминант, каждая из которых, в свою очередь, стимулируег различные тины рецепторов. Помимо этого на гетерогенность антисыворотки оказывают влияние тип иммунизированного животного и стадии иммунного процесса. Новый путь получения антител был разработан Келером и Милынтейном в году . Они выделяли из организма иммунизированного животного клетки лимфоцитов и гибридизовали их с миеломными клетками. Гибридные клетки получили название гибридомы. Полученные таким образом антитела называют моноклональными. Открытие метода получения моноклональных антител существенно упростило задачу изучения их структуры и свойств, а также открыло новые возможности при разработке иммунохимических методов. Антитела или иммуноглобулины по своей структуре представляют собой гликопротеиды, т. Антитела в живом организме несут на себе две основные функции распознавание и специфическое связывание соответствующих антигенов и эффскгорную функцию, заключающуюся в индукции важнейших физиологических процессов, направленных на уничтожение антигена. По своим антигенным, эффекториым и структурным особенностям иммуноглобулины подразделяют на пять основных классов 1, 1, 1еА, ДО, . Основную структурную единицу молекулы антитела образуют четыре полипептидные цепи две идентичные легкие Ьцепи, каждая примерно из 0 ак остатков и две идентичные тяжелые Нцепи, каждая примерно из 0 ак остатков. Все четыре цепи соединены между собой с помощью нековалентных взаимодействий и ковалентных связей дисульфидных мостиков рис. Рис. Схематическое изображение строения основного структурного фрагмента молекулы иммуноглобулинов. Каждая и Нцепь иммуноглобулина состоит из вариабельной области длиной примерно 0 ак остатков на конце и следующей за нею константной области. Каждая цепь составлена из повторяющихся сходным образом свернутых доменов у цепи имеется один домен в вариабельной области VI. Нцепи один домен в вариабельной области V и три или четыре в константной области СН. При расщеплении иммуноглобулина папаином можно выделить два фрагмента фрагмент антигенсвязывющий центр и фрагмент, который обуславливает различные эффекторные функции антител, такие как связывание белка комплемента, реакция с макрофагами, транспорт через мембраны. В противоположность Сконцевой части тяжелых и легких цепей аминокислотная последовательность их концевой области сильно варьирует. Некоторым положениям присуща весьма выраженная вариабельность. Такие участки называют гипервариабельными, они непосредственно участвуют в формировании антигснсвязывающего центра антитела, или паратопа. Каждый паратоп имеет размеры, достаточные для того, чтобы контактировать с антигенной детерминантой, соответствующей пяти шести остаткам сахаров или ак остаткам . Общепринято подразделять эпитопы на линейные синонимы протяженные, непрерывные и конформационные синонимы топографические, разрывные, ассоциированные 2 . Линейные детерминанты представляют собой непрерывные участки полипептидной цепи, с которыми связываются антитела, полученные к нативному белку. Конформационные эпитопы состоят из аминокислотных остатков или участков полипептидной цепи, которые не являются соседними в аминокислотной последовательности белка, но сближены между собой в пространстве вследствие третичной укладки и образуют на поверхности нативного белка стабильные топографические структуры. Конформационные детерминанты отличаются от линейных тем, что соответствующие антитела связываются с ними, если они находятся не в любой, а строго определенной конформации.