Изучение структуры протонной аденозинтрифосфатазы митохондрий. Триптические и бромциановые пептиды OSCP-белка

• Автор: Трубецкая, Ольга Евгеньевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

ПРОТОННЫЕ АДЕНОЗИНТРИФОСФАТАЗЫ БАКТЕРИЙ И МИТОХОНДРИЙ

1. Субъединичный состав НАТРазного комплекса . .

2. Стехиометрия субъединиц НАТРазных комплексов бактерий и митохондрий. . .

3. Биогенез НАТРаз бактерий, митохондрий, хлоропластов

4. Аминокислотная последовательность отдельных субъединиц НАТРаз бактерий, митохондрий и хлоропластов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУВДЕНИЕ.

1. Выделение и характеристика ОБСР

2. Исчерпывающий гидролиз ОБСР трипсином. Вьщеление и анализ пептидов

3. Выделение и характеристика продуктов бромцианового расщепления ОБСР .
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


А.ОВЧИННИКОВУ за постоянное внимание к данной работе кандидату химических наук ГРИНКЕВИЧУ В. А., кандидату химических наук АЛДАНОВОЙ . МОДЯНОВУ . ЛИТЕРАТУРЫ
ПРОТОШЫЕ ДЩОЗИШРИФОСФАТАЗЫ Б И ЩТОХОЩРИЙ
В году советскими учеными Белицером и Цыбаковой I было обнаружено сопряжение между процессами аэробного окисления и фосфорилирования. С тех пор изучение молекулярного механизма, при помощи которого энергия, полученная в результате реакции окисления субстратов ферментами дыхательной цепи и в процессе фотосинтеза, запасается и используется для синтеза АТР, является главным предметом биоэнергетики. В году известный биохимик Ф. Р фосфорильная группа. Однако все попытки найти фосфорилированные переносчики электронов не увенчались успехом. X X . Однако макроэргический предшественник аденозинтрифосфата X У также не был обнаружен. Кроме того химическая гипотеза сопряжения не учитывала роли мембран в окислительном фосфорилировании. В году английский биохимик Питер Митчел выступил с новой и весьма необычной гипотезой окислительного фосфорилирования, названной им хемиосмотической 4. Принцип этой гипотезы, повторно представленной ее автором в году в видоизмененной форме 5, состоит в предположении о том, что дыхание и фосфорилирование связаны между собой через разность электрохимических потенциалов ионов водорода на митохондриальной мембране. АТРсинтетазного устройства, превращающего энергию Дуии в энеРгиго уЗ Г фосфатной связи АТР. Параллельно со становлением хемиосмотической теории Митчела развивалось исследование фермента, осуществляющего синтез АТР с использованием энергии окисления. Важным инструментом для изучения транспорта энергии стали макроцикл ический антибиотик олигомицин 69 и , дициклогексилкарбодиимид ДЦВД , которые ингибируют окислительное фосфорилирование и стимулируемое I дыхание митохондрий. СМЧ и был назван сопрягающим фактором I Р. АТРгидролазная активность инактивируется под действием низких температур и не ингибируется олигомицином и ДЦВД, однако прикрепление Р к мембране вызывает появление устойчивости фермента к холоду и чувствительности к ингибиторам . Через 5 лет Кагавой и Рэкером , было описано выделение белковой мембранной фракции митохондрий сердечной мышцы быка, сообщающей чувствительность к ингибиторам. Эта фракция была названа 0 индекс О означает чувствительность к олигомицину. Было показано, что для реконструкции 10активного комплекса необходимо добавление фосфолипидов, а также обнаружено, что местом действия олигомицина является р0сектор. Впервые нативный гомогенный препарат РРд НАТРазы был выделен из термофильной бактерии КЗ путем экстракции мембран тритоном Х0. Впоследствии с использованием методов экстракции мембран различными детергентами холат, дезоксихолат, тритон Х0, СНАРБ , а также аффинной хроматографией были получены многочисленные препараты комплексов из митохондрий ,, бактерий и хлоропластов ,. Выделенные ЭТИМИ методами Р0КОМПЛеКСЫ в большей или меньшей степени содержат примеси компонентов дыхательной
цепи, АЛР АТР транслокатора и липидов. Они катализируют олигомицини ДЦКДчувствительный гидролиз АТР. Включение некоторых препаратов в искусственные фосфолипидные липосомы приводит к реконструкции энергозависимых реакций, таких,
как АТРР обмен ,, АТРзависимый транспорт ионов , и Дд зависимый синтез АТР ,. Периферический компонент НАТРазной системы р был выделен в гомогенном виде из различных источников , все препараты Р обладают АТРгидролазной активностью, растворимы в воде и не содержат липидов, молекулярная масса кДа. ВРТ, митохондрий МРТ и хлоропластов СРТ представляет
собой сферическую глобулу с диаметром 0 А , прикрепленную к мембране. А . Считается общепринятым, что каталитический центр гидролиза и синтеза АТР локализован на р, поэтому этот фактор получил название каталитической части НАТРазного комплекса. По данным электрофореза в полиакриламидном геле ПААТ в присутствии додецилсульфата натрия ЭВБ Р митохондрий, бактерий и хлоропластов содержит 5 типов субъединиц, обозначаемые в порядке убывания молекулярных масс Мг Я.