Структура и свойства ключевого ядрышкового белка-нуклеофозмина в клетках HeLa

• Автор: Сауткина, Елена Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 126 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений.

Введение

Глава 1. Структурная характеристика нуклеофозмина

и его роль в клеточных процессах обзор литературы.

1.1. Основные свойства и характеристики нуклеофозмина.

1.1.1. Структура гена нуклеофозмина

. 1.2 А минокислотная последовательность и доменная

организация нуклеофозмина

1 1.3 Внутриклеточная локализация нуклеофозмина

1.1 4. Нуклеофозмин фосфопротеин.

1.1.5. Очиго меризация нуклеофозмина.
1.1.6. Нуклеофозмин молекулярный шаперон.
1.1 7. Взаимодействие нуклеофозмина с нуклеиновыми кислотами.
I 1.8 Взаимодействие нуклеофозмина с другими белками.
1 2. Структурнофункциональное состояние нуклеофозмина
в процессе митоза и апоптоза
1. Структура и свойства нуклеофозмина в митозе.
1 2.1 Структура и свойства нуклеофозмина при апоптозе
Глава 2. Структура и свойства ключевого ядрышкового
белка нуклеофозмина в клетках результаты и их обсуждение
2.1. Анализ мономеролиюмерного состояния нуклеофозмина в
опухолевых клетках человека.
2 1.1. Состояние моно мерных и устойчивых олиго иерных
форм нуклеофозмина в клетках
2 1.2. Состояние мономерных и ЗОЗустойчивых олигомерных
фор и нуклеофозмина в различных опухолевых клетках человека.
2 2. Свойства БЭБустойчивых олигомерных форм нуклеофозмина
в клетках НеЬа.
2.3 Структурный анализ нуклеофозмина в клетках НеЬа.
2 3.1. Состояние мономерных и БОЗустойчивых олигомерных
форм нуклеофозмина в ядрах и ядрышках клеток НЖа
2.3.2 Получение фракции, содержащей нуклеофозмин из ядер клеток Не1а
2 3.3 Структурный анализ нуклеофозмина в составе ядер клеток НеЬа
2 4. Состояние мономерных и БОБустойчивых олигомерных форм
нуклеофозмина в клетках НеЬа при апоптозе, индуцируемом ТКТа
2.4.1 Индукция апоптоза и получение апоптозных клеток
2.4 2 Изменения ВРпри апоптозе.
2 4.3 Изменения нуклеофозмина при апоптозе.
Глава 3. Экспериментальная часть
Выводы.
Список литературы


К сожалению, в настоящее время имеется мало информации о ядрышковых белках, их роли в нормальных и опухолевых клетках. Предметом нашего исследования стал нуклеофозминбелок ВнуматринЮ ключевой иерибосомный белок ядрышка, содержание которого в актнвнопролиферирующих и раковых клетках и тканях в 5 раз выше, чем в нормальных . Известен ряд функциональных особенностей этого белка вопервых, нуклеофозмин является челноком, переносящим белки, постоянно курсирующим между ядром и цитоплазмой i , , вовторых, служит молекулярным шаиероном, предотвращающим белки от афсгации i , втретьих, ломкий ген нуклсофозмина включен в ряд хромосомных транслокаций, что приводит к образованию смешанных i белков, изменяя присущую им локализацию в клетке и свойства . Нуклеофозмин обладает также РНКсвязывающей и эндонуклеазной активностями , v , . Полифункцноналыюсть заложена в самой структуре этого белка он не только экспрессируется в виде двух изоформ, но и существует как в мономерных, так и олигомерных формах. Ключевая роль нуклсофозмина во многих жизненноважных процессах, протекающих в ядрышке предопределила наш первоочередный интерес к этому белку. Глава 1. В клетке нуклеофозмин белок В представлен двумя изоформами В. В.2 . У человека геи нуклеофозмина расположен на пятой хромосоме и содержит тысяч пар оснований , , у крысы тысяч пар основании , . Строение гена нуклеофозмина крысы и человека сходно он состоит из экзонов, кодирующих 2 или 4 аминокислотных остатка у крысы и человека, соответственно, причем экзоны 19 и кодируют мРНК изоформы В. РНК изоформы В. Изоформы имеют идентичные нетранслируемые 5нуклеотидные последовательности и последовательности, кодирующие концевые аминокислотные остатки и различаются Сконцевыми доменами и иетранслируемыми 3нуклеотидными последовательностями. Хотя гомолоия между кодирующими последовательностями в нах человека и крысы велика и составляет около , никакой гомологии между нитронами этих енов не обнаружено . Также известно, что существуют пронессироваиные псевдо сны белка В пять в геноме крысы , и семь в еноме человека i , , причем все они представляют собой последовательность изоформы В. В раковых и активнопролиферирующих клетках уровень мРПК нуклеофозмнна в и 5 раз выше в клетках генатомы Новикова и гипертрофированной печени крысы, соответственно, чем в нормальных . Несмотря на то, что ген нуклеофозмнна обладает всеми характеристиками так называемых i енов, одиако он также содержит сигнальные последовательности, характерные для ткаисспецифичных генов, что означает наличие возможных дополнительных факторов регуляции транскрипции и альтернативного сплайснна в различных типах клеток , . На 5коицевом участке нуклеотидной последовательности гена идентифицирован сайт связывания с транскриптационным фактором 1 i 1 . Показано, что 1 при связывании подавляет транскриптациоиную активность гена нуклеофозмнна, однако при увеличении экспрессии белка В происходит белковое взаимодействие между I и нуклеофозмином, что приводит к нарушению связывания I с нуклеотидной последовательностью I , . Также показано, что нитрон 1 гена нуклеофозмнна содержит последовательность, отвечающую за связывание с онкогенным фактором транскрипции сМус, известным своей ролью в индукции клеточного роста, независимой от пролиферации , . Еще одной важной особеностью гена нуклеофозмнна человека является то, что он содержит так называемый участок ломкости расположен внутри последовательности интрона 4, де наиболее часто происходит транслокация генных локусов и целых хромосомных участков. При этом образуются i6 смешанные белки, характерные при онкологических заболеваниях в некоторых типах неопластических клеток , . В.1 и тирозин киназы при лимфомах за исключением лимфомы Ходжкина i . Также известны i6 нуклеофозмина и белка рецептора ретиноевой кислоты с точкой излома 5 . V3VIVV 7 VV7VI 6 V. Рис 2. Сравнение аминокислотных последовательноеей изоформы В 1 из различных организмов Звездочками обозначены идентичные аминокислотные остатки, двумя точками гомологичные аминокислотные остатки.