Поиск белков, взаимодействующих с противомозином α , с помощью дрожжевой двугибридной системы

• Автор: Карапетян, Рубен Навасардович
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 106 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

Список условных обозначений

Введение.

1. Дрожжевая двугибридная система и ее применение

в молекулярной биологии обзор литературы

1.1. Что такое дву гибридная система

1.2. Преимущества дрожжевой двугибридной системы

перед методами i vi и бактериальными системами поиска взаимодействующих белков

1.3. Новые версии двугибридной системы.

1.4. Одногибридная система.

1.5. Применение дрожжевой двугибридной системы.

1.6. Поиск новых белокбелковых взаимодействий с помощью
дрожжевой двугибридной системы.
1.7. Заключение
2. Поиск белков, взаимодействующих с протимозином а, с помощью дрожжевой двугибридной системы
обсуждение результатов.
2.1. Дрожжевая двугибридная система на основе x.
2.2. Протимозин а человека не является
автоактиватором транскрипции
2.3. Скрининг библиотек кДНК с помощью дрожжевой
дву гибридной системы.
2.4. Определение участков в протимозине а и , ответственных за их взаимодействие
2.5.Проверка взаимодействия протимозина а и i vi.
2.6. Получение поликлональных антител к Сконцу
2.7. Коиммунопреципитация с протимозином а
из лизата клеток
2.8. Протимозин а конкурирует с i vi с 2 за связывание
с
2.9. Модель участия протимозина а в процессе клеточною ответа
на окислительный стресс
3. Экспериментальная часть.
3.1. Используемые штаммы микроорганизмов и реактивы
3.2. Используемые методы.
3.3. Конструирование плазмид.
Список литературы


Введение. Новые версии двугибридной системы. Одногибридная система. Применение дрожжевой двугибридной системы. Дрожжевая двугибридная система на основе x. Проверка взаимодействия протимозина а и i vi. Получение поликлональных антител к Сконцу
2. Экспериментальная часть. Используемые методы. Конструирование плазмид. Список литературы. Для аминокислот и их производных использовались обозначения, рекомендованные комиссией по номенклатуре Международного союза чистой и прикладной химии ШРАС и Международного союза биохимиков ШВ. ЮТР дезоксирибонуклеозид5 трифосфат п. X 5бромо4хлоро3индолил0галактопиранозид. Ключевую роль в процессах, протекающих в клетках живых организмов, играют взаимодействия между белками. Для понимания механизмов, по которым протекают эти процессы необходимо знать, какие белки в них участвуют. Благодаря проектам по секвенированию геномов различных организмов появляется все больше информации о новых белках и их структуре. Однако, даже самая полная информация о структуре белка не позволяет определить его функцию в клетке. Одним из способов понять, какую роль в клетке играет белок X, является поиск его молекулярных партнеров, т. Информация о белках, взаимодействующих с исследуемым, может указать на его участия в тех или иных клеточных процессах. Кроме того, таким образом можно проверить, действительно ли белок X участвует в изучаемом процессе. Одним из наиболее мощных и широко используемых методов исследования белокбелковых взаимодействий является дрожжевая двугибридная система 1. Она позволяет не только тестировать i viv взаимодействия между известными белками, но и искать новые белки, взаимодействующие с иследуемым. Данная работа посвящена идентификации белкапартнера протимозина а человека. Протимозин а эго небольшой кДа, мультикопийный около копий на клетку и очень кислый белок млекопитающих изоэлектрическая точка р13,5 почти половина его аминокислотных остатков это остатки аспарагиновой и глутаминовой аминокислот. Данный белок практически лишен элементов вторичной структуры и существует в виде статистического клубка при физиологических условиях 2. На данный момент накоплено большое количество эксперименталных данных, указывающих на участие протимозина а в процессах клеточного деления. Однако, достоверных сведений о механизме его действия в клетке пока нет. В данной работе с помощью дрожжевой дву гибридной системы мы попытались найти белки, с которыми взаимодействует протимозин а человека, для того, чтобы понять какую роль он играет в клетке и в каких процессах участвует. Белокбелковые взаимодействия лежат в основе практически всех процессов, протекающих в клетке. Репликация ДНК, транскрипция, сплайсинг, трансляция, контроль клеточного цикла это далеко не полный перечень процессов, контролируемых взаимодействиями между различными белками. Образование клеточных структур, таких как цитоскелет, ядерньк поры, веретено в митозе, микротрубочки результат взаимодействия между белками. Кроме структурных образований на основе белокбелковых взаимодействий, существует большое количество транзитных непродолжительных взаимодействий между белками, контролирующих и регулирующих многие клеточные процессы. Все модификации белков осуществляются именно за счет таких взаимодействий. Киназы, фосфатазы, ацил трансферазы и протеазы взаимодействуют со своими белковыми субстратами непродолжительно, т. Такие белокмодифицирующие ферменты играют важную роль в различных клеточных процессах, например, росте клеток, клеточном цикле, передаче сигнала. Поэтому для понимания механизмов протекающих в клетках процессов необходимо определить, какие белки взаимодействуют между собой. В последнее время стали активно разрабатываться методы определения белокбелковых взаимодействий. Одним из наиболее мощных и многофункциональных методов поиска взаимодействующих белков является дрожжевая двугибридная система, разработанная Стенли Филдсом 1, 3 и много раз изменявшаяся и дополнявшаяся другими исследователями.