Взаимодействие бактериальных эндотоксинов с хитозаном

• Автор: Давыдова, Виктория Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 126 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
1. Введение

2. Л шерп прими обзор

2.1 Физикохимические и биологические свойства ЛПС.

.1. Строение ЛПС.

2.1.2. Физикохимические свойства ЛПС

2.1.3. Биологическая активность эндотоксинов.

2.2 Взаимодействие ЛПС с соединениями катионной природы.

2.2.1. Взаимодействие с клеточными рецепторами и белком, связывающим

2.2.2. Взаимодействие с белком, увеличивающим

бактерицидную проницаемость

2.2.3 Взаимодействие с белками млекопитающих, снижающими токсические свойства ЛПС
2.2.4 Взаимодействие с лизоцимом.
2.2.5. Взаимодействие с гемоглобином.
2.2.6. Взаимодействие с альбумином.
2.2.7. Взаимодействие с липопротеинами.
2.2.8. Взаимодействие с белками насекомых
2.2.9. Взаимодействие с антибиотиками
2.2 Некоторые аспекты детоксикации ЛПС.
2.3 Физикохимические и некоторые биологические свойства хитозана.
2.3.1. Молекулярная структура хитозана.
2.3.2. Физикохимические свойства хитозана.
2.3.3. Некоторые биологические свойства хитозана и области его применения
3. Обсуждение результатов
3.1 Общая характеристика компонентов комплекса
3.1.1. Характеристика эндотоксинов.
3.1.2. Характеристика хитозанов
3.2 Особенности процесса взаимодействия эндотоксинов с поликатионами
3.2.1. Изучение взаимодействия ЛПС с хитозаном методом гельфильтрацих. Доказательства существования комплекса
3.2.2. Влияние температуры и времени инкубации на процесс формирования
комплексов эндотоксинхитозан. Оптимальные условия
комплексообразоваиия
3.3. Влияние структуры эндотоксина и молекулярной массы хитозана на процесс формирования комплекса.
3.3.1 Влияние структуры эндотоксина
3.3.2. Влияние молекулярной массы хитозана на процесс образования
комплексов
3.4. рирода сил, участвующих в процессе формирования комплекса.
3.4.1. Влияние ионной силы на процесс формирования и стабильност ь образовавшихся комплексов.
3.4.2. Влияние мочевины на процесс формирования комплекса.
3.5. Определение количественных характеристик взаимодействия ЛИС с хитозаном
3.6. Математической моделирование взаимодействия ЛИС с хитозаном.
3.7. Модификация биологической активности ЛИС. в результате образования его комплекса с хитозаном
3.7.1. Острая токсичность
3.8.2. Иммунобиологические свойства
4. Окснеримектальнаи часть.
5. Выводы
6. Список цитированной литературы
ВВЕДЕНИЕ


АегоЬааег аегоцспез II. Езссгса со . Леви с соавторами обнаружили, что ЛПС присутствует в клеточной стенке бактерий В виде двух форм экстрагируемой и нсэкстрагируемой ДТА. ЛГ1С, экстрагируемого ЭДТА, зависит от длины Оспецифической цепи . Результаты последовательной экстракции различными реагентами эндотоксинов из ii i показали, что ЛПС с длинной Оцепью находится в тесной ассоциации с белком и экстрагируется в виде ЛПБК ЭДТА и ТХУ . Неэкстрагирусмыс этими растворителями ЛИС с более короткой цепью, вероятно, участвуют в образовании липидных бислосв внешней мембраны и экстрагируются фенолом, как наиболее жестким реагентом . Хорошо известна структурная гетерогенность липида Д, которая вызвана различным количеством и распределением остатков жирных кислот и других заместителей липидного фрагмента . С помощью ионообменной хроматографии была обнаружена значительная гетерогенность липидной компоненты эндотоксинов по заряду, обусловленная различным соотношением фосфатных групп с одной стороны и противоионов и аминогрупп с другой . Разное соотношение основных компонентов комплекса ЛИС и белка также может быть одной из причин полидисперсности ЛПБК. Такие ЛПСбелковые фракции, выделенные из клеточных стенок грамотрицательных бактерий Г. Полидисперспость по размерам агрегатов. Многочисленными исследователями установлена полидисперсмость ЛПС по размерам. Бактериальные ЛПС являются амфифильными соединениями, сочетающими в пределах одной молекулы гидрофильный углеводный и гидрофобный липидный фрагменты и, подобно другим амфифильным соединениям, образуют в водных растворах агрегаты. Еще в ранних работах Людеритц и Вестфаль показали, что эндотоксины формируют полидисперсные аг регаты , молекулярные массы которых могут варьировать от I до мДа. Такая лолвдиспсрсиосгь установлена различными гидродинамическими методами для ЛПС и ЛПБК из многих бактерий. Совокупность данных, полученных при изучении ЛПБК и ЛПС из . В водных растворах существует динамическое равновесие между агрегатами ЛИС и их макромолекулами. Разбавление растворов сопровождается диссоциацией частиц эндотоксинов, а переход от водных к солевым растворам вызывает сильное уменьшение размеров агрегатов . Кроме того, агрегаты эндотоксинов способны диссоциировать под действием различных реагентов. Диссоциация ЛПС под действием детергентов носит обратимый характер. Удаление детергентов приводит к реассоциации агрегатов, при этом степень полидмсперстности ЛПС уменьшается . Существенное влияние на размер и форму агрегатов ЛИС и ЛПБК в растворе оказывает температура. Для эндотоксинов из У. I i была установлена сложная зависимость молекулярной массы и коэффициента седиментации от температуры. С увеличением последней от 8 до С сначала наблюдалось увеличение размеров агрегатов . При переходе от С до С молекулярная масса агрегатов ЛПС уменьшалась в раз. Соответственно этому изменялась асимметрия частиц ЛПС. Крупные и сильно асимметричные i образуются в растворах в области температуры С . Подобное образование больших агрегатов при физиологических температурах было обнаружено для ЛПС из ii методом светорассеяния . Анализ температурной зависимости молекулярной массы и коэффициентов седиментации ЛПБК из У. ХС. Первые два выше и ЯС обусловлены ЛIIсоставляющей и вызваны плавлением ацильных цепей липида А и гидратацией молекул ЛПС, последний выше С связан с белковой компонен той . Концентрация, при которой происходит образование агрегатов, называется критической концентрацией агрегатов ККА. Свыше этой концентрации существует равновесие между свободными мономерами и агрегатами. ККА, которая определяется числом свободных мономеров, зависит от длины полисахаридной цепи, числа и распределения зарядов, а также от степени гкдрофобности. Таким образом. ККА выше для ЛПС форм. Оспецифическими цепями, и уменьшается при переходе к грубым мутантным штаммам, достигая минимального значения в случае липида А . Анализ ряда образцов ЛПС из . А и ЛПС с короткими Оцспями из . ККА. II 1 с более длинными целями имели более высокую ККА .