Структура и свойства липида А - компонента липополисахаридов YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS

• Автор: Красикова, Инна Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 134 c. : ил

1. Химическое строение и биосинтез липида А

1.1. Липид А как структурный компонент липополисахаридов граыотрицательных бактерий .

1.2. Выделение липида А и его гетерогенность

1.3. Общая характеристика липида А

1.4. Структура углеводного скелета

1.5. Характеристика фосфатных групп липида А .

1.6. Определение типа связи липида А с ВДО .

1.7. Гидрофобная часть липида А жирные кислоты

1.8. Структура липида А из различных источников

1.9. Биосинтез липида А

2. Биологические свойства липида А

2.1. Зндотоксические свойства
2.2. Липид А как стимулятор неспецифической резистентности .
2.3. Иммунологические свойства липида А
3. Заключение Связь химической структуры с биологическими свойствами липида А
Ш. Обсуждение результатов .
1. Выделение и общая характеристика липида А
2. Структура углеводного скелета липида А псевдотуберкулзного микроба
3. Жирные кислоты липида А псевдотуберкулезного микроба
4. Гетерогенность липида А .
5. Определение характера связи остатков жирных кислот
с углеводным скелетом липида А .
6. Определение положения фосфатных групп в липиде А псевдотуберкулезного микроба .
7. Использование спектроскопии СЯМР для структурного исследования липида А
8. Сравнительная характеристика липида А
различных сероваров .
9. Иммунологические свойства липида А псевдотуберкулезного микроба и структура его детерминантной группы
. Экспериментальная часть .
У. Выводы
. Литература
ВВЕДЕНИЕ


Существует два принципиальных подхода к получению липида А. Известно большое количество мутантных штаммов, которые синтезируют дефектные ЛПС, содержащие только липид А и 2кетоЗдезоксиоктоновую кислоту ИДО. Такие гликолипиды представляют собой хороший исходный материал для исследования липида А . Во втором случае липид А может быть выделен из любого ЛПС кислотным гидролизом. Эта обработка разрывает кетозидную связь, с помощью которой липид А соединяется с олигосахаридом кора . Показано , что условия выделения липида А кислотным гидролизом зависят от бактериального источника ЛПС. Повидимому, возможен ещ один способ получения липида А биодеградация ЛПС. Так, например, ЛПС ii i, i xi i ПОД действием КИШвЧНОГО улитки ix i теряют антикомплементарную активность и изменяют подвижность в полиакриламидном геле . Предполагается, что кишечный сок улитки удаляет часть или весь липида А. Несколько раньше были получены подобные результаты с плесенью i ii ii, под действием которой наблюдалось удаление из ЛПС жирных кислот со сложноэфирной или амидной связью. Многочисленными исследованиями 4, 7, , , показано, что липид А негомогенен и может быть разделен на несколько фракций хроматографией в тонком слое, колоночной хроматографией и другими методами. Установлено, что липид А может отличаться гетерогенностью уже в составе ЛПС . Эта внутренняя микрогетерогенность липида А обнаружилась, когда вгликодипида изучались хроматографией в тонком слое . При этом было выделено несколько фракций различного состава. Как показало изучение структуры предшественников липида А , , условия культивирования микроорганизмов могут стать причиной гетерогенности, приводя к образованию замещенных или незамещенных полярными заместителями дифосфорилированных производных 6глюкозаминобиозы, как, например, в липиде А рода , содержащем от до 4аминоарабинозы , или В ЛИПИДе . В КОТОРОМ Молекул ДИсахарида замещено остатками маннопиранозы . Поскольку липид А содержит связи различной устойчивости к действию кислоты, неизбежна деградация некоторых, особенно лабильных участков при гидролизе ЛПС, что приводит к образованию сложной смеси . Нельзя исключать также непропорциональное распределение остатков жирных кислот, вызванное присутствием свободных гидроксильных групп в липиде А . В ряде работ отмечено влияние температуры продуцирования микроорганизмов и набора жирных кислот в питательной среде на жирнокислотный состав липида А, что также может стать причиной его гетерогенности. Накопленные ранее данные показывают, что образцы липида А, выделенные из самых различных бактерий, идентичны между собой или родственны в отношении их общей структуры и состава 4, 6,
Неочищенный липид А, полученный мягким кислотным гидролизом, представляет собой смесь фракций, разделимых с помощью экстракции , осаждения или хроматографии колоночной на силикагеле , , , , сефадексе ьн , , , сефадексе , тонкослойной С , , , или жидкостной . Он не имеет точки плавления, характеризуется отрицательными значениями удельного вращения ИКСпектроскопия липида А указывает на присутствие сложноэфирных см и амидных , , 0 см связей , . Исследования различных лабораторий 4, 7, , 7 свидетельствуют о наличии в липиде А трех основных составляющее глюкозамина до , фосфора 2 и жирных кислот . Пептиды и фосфолипиды, также присутствующие в липиде А в небольших количествах, либо образуют с ним комплексы , , либо связаны ковалентно . ЛПС высоковольтным электрофорезом, ионообменной хроматографией или электродиализом , . Таким образом, анализ липида А указывает на его амфипатичность, обусловленную присутствием как гидрофобных жирные кислоты, так и гидрофильных глюкозамин, фосфор составляющих. Етасозамин является важной составляющей липида А, хотя к настоящему времени известны ЛПС, липид А которых не содержит глюкозамин , , , , . Из молекулярной массы липида А около 2 кд , следует, что в его состав входят два остатка глюкозамина. Строгое доказательство дисахаридной природы углеводного скелета липида А было получено обработкой ЛПС из Ле мутанта э.