Тонкослойная хроматография диацилглицеринов и ее применение для анализа видового состава их смеси

• Автор: Пчелкин, Василий Петрович
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 123 с.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

1.1 Методы хроматографического фракционирования липидов.

1.2 Анализ смесей нативных липидов

1.3 Анализ смесей липидов в виде продуктов их гидролиза.

1.3.1 Разделение диацилглицеринов по величине лнпофильности.

1.3.2 Разделение диацилглицеринов по ненасыщенности.

1.4 Анализ смесей липидов в виде производных диацилглицеринов

1.4.1 Фракционирование ацетилдиацилглицеринов.

1.4.2 Фракционирование других производных диацилглицеринов .

1.5 Заключение . .
Глава. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
П.1 Синтез метиловых эфиров жирных кислот.
Н.2 Получение тримстилбората
И.З Приготовление препаратов диацилглицеринов.
.3.1 Получение смеси триацилглицеринов и ее глицеролиз
.3.2 Получение смеси гас1,2и гас1,3диацилглицеринов модельной смеси I из продуктов глицеролиза.
.3.3 Получение смеси гас 1,2изомсров диацилглицеринов модельной смеси 2 из модельной смеси 1.
.3.4 Получение стандартных смесей гас1,2 гас1,3диацилглицеринов и гас1,2диацил глицеринов простого видового состава
.4 Изготовление пластинок с постоянным слоем для тонкослойной хроматографии .
.5 Тонкослойная хроматография смесей диацилглицеринов.
И.5.1 Обрашсннофазовая хроматография.
И.5.2 Адсорбционная хроматография в присутствии ионов серебра
И.5.3 Обращсннофазовая хроматография в присутствии ионов серебра
двумерная хроматография
.6 Обнаружение зон диацилглицеринов и полуколичсствснная оценка
видового состава стандартных смесей диацилглицерннов и модельной смсси .
.7 Расчет параметров хроматографического разделения .
.8 Расчет статистического видового состава смесей диацилглицерннов.
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТ Ы
III. 1 Составление смеси триацилглицеринов для глицеролиза.
1.2 Получение модельной смсси
1.3 Синтез стандартных смсссй диацилглицерннов простого состава
1.4 Обращннофазовая тонкослойная хроматография диацилглицеринов модельной смсси 1 в виде их димстилборатных эфиров
1.5 Идентификация диацилглицеринов в модельной смсси 1 по данным обращеннофазовой тослойной хроматографии.
1.6 Получение модельной смсси 2 и адсорбционная тонкослойная хроматография гас 1,2диацилглицсринов этой смеси в присутствии ионов серебра
1.7 Принцип идентификации и идентификация индивидуальных видов диацилглицеринов в модельной смсси 2 по данным адсорбционной
тонкослойной хроматографии в присутствии ионов серебра.
1.8 Идентификация индивидуальных видов диацилглицеринов в модельной смеси 2 по данным обращннофазовой тонкослойной хроматографии в присутствии ионов серебра
II 1.9 Идентификация стеароиллинолеоил и стеароиллнноленоилглицеринов путм двумерной тонкослойной хроматографии в присутствии ионов серебра
Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТО В
IV. 1 Получение диацилглицеринов путем глицеролиза трнацилглицеринов.
IV.2 Обращеннофазовая тонкослойная хроматография димстилборатных эфиров диацилглицеринов .
IV.3 Полнота фракционирования гас1,2днаиилглицеринов в условиях тонкослойной хроматографии с ионами серебра.
IV.4 Сопоставление тонкослойной хроматографии кординационных
комплексов с другими хроматографическими методами по полноте
фракционирования диацилглицеринов
1У.5 Функциональная зависимость между свойствами индивидуальных видов ненасыщенных гас1,2диацил глицеринов и их подвижностью в условиях адсорбционной и обращннофазовой тонкослойной хроматографии с ионами серебра
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Поэтому в настоящее время для аналитического или препаративного разделения того или иного класса липидов на индивидуальные виды необходимо использовать последовательно несколько хроматографических методов. К их числу принадлежат жидкостная ЖХ и газожидкостная хроматография ЖХ. До сих пор главным методом определения видового состава таких липидов обычно служила ГЖХ. Однако для с осуществления необходимо сначала получить летучие лилоф ильные Опроизводные ДАТ, что значительно затрудняет последующую регенерацию исходных ДАГ. Кроме того, получение таких производных, особенно ненасыщенных, нередко связано с большим или меньшим нарушением нативности проб исходных ДАГ обычно он сопровождается изменением состава таких проб, что вызывается их частичной потерей и разрушением в ходе синтеза. Наконец, само ГЖХфракционированис Опроизводных ДАГ приводит к абсорбции части липидов в колонке . Для ГЖХ этих производных в большинстве случаев пригодны только неполярные стационарные фазы, обеспечивающие фракционирование лишь по числу атомов углерода т. Хотя в последние годы 1ЖХ производных ДАГ проводили и на полиэфирных стационарных фазах , ГЖХразделение данных производных по числу олефиновых связей е ещ не получило широкого распространения, что ограничивает применимость ГЖХ для анализа преобладающих в природных липидах ненасыщенных ДАГ. Кроме того, выполнение их ГЖХфракционирования часто затруднено вследствие термолабильности полярной стационарной фазы. Все эти факторы сильно снижают количество информации о видовом составе ДАГ, получаемой при ГЖХанализс, даже в сочетании с массспсктромстрисй в данной работе ГЖХ использовали лишь для определения жирнокислотного состава ацилглицеринов. Мы приходим к выводу, что для исследования состава смесей насыщенных и ненасыщенных видов ДАГ целесообразно применять другую разновидность хроматографии ЖХ. Таким образом, задача настоящей диссертационной работы состояла в определении видового состава сложной смеси ДАГ методами их ЖХразделения, и эта задача является актуальной. Глава I. Для определения видового состава липидов до сих пор использовали как нативные липиды, так и их производные продукты гидролиза липидов ДАГ и различные липофмльные производные ДАТ. С целью их разделения авторы применяли две главные модификации ЖХ 1 обращ ннофазовую ОФ тонкослойную хроматографию ТСХ и ОФ высокоэффективную ЖХ ВЭЖХ, 2 адсорбционную ТСХ и ВЭЖХ лабильных лкомплсксов ненасыщенных липидов с ионами серебра ЛТСХ и ЭЖX, соответственно, а также различные сочетания этих методов. Теоретические основы каждого из них описаны в монографиях Кирхнера и Энгельгардта . Методом ОФХ смеси липидов одного и того же класса можно разделить согласно их эквивалентной липофильности Ь тм. Такое разделение далее обозначается термином . Ранее для ,фракционирования чаще всего использовали ОФ ТСХ на силикагеле, покрытом тонкой плнкой высших углеводородов. В настоящее время с этой целью обычно применяют ОФ ВЭЖХ на гидрофобном носителе с размером частиц 3 мкм, поверхность которых образована химически привитыми углеводородными цепями 7. В свою очередь, в условиях АвТСХ анализируемая смесь липидов, как правило, также разделяется на отдельные фракции фракции, получение которых ниже обозначается термином фракционирование. В каждой фракции обычно сгруппированы липидные молекулы с одинаковым, характерным для данной фракции, числом двойных связей. В то же время, при фракционировании ненасыщенных липидов и их производных часто происходит разделение соединений с одним и тем же , но с разным жирнокислотным составом . Исследования по хроматографическому определению видового состава липидов весьма многочисленны. Ятя того, чтобы оценить достоверность результатов каждого такого определения, литературные данные по I и фракционированию липидов обрабатывали математически. При рассмотрении литературных данных кроме раздела Р. Я , вычисленной для наименее разделившейся пары соседних компонентов той или иной смеси. Если эта величина превышала 1,5, то разделение этих компонентов между собой считали удовлетворительным. Когда количественный жирнокислотный состав полученных .