Нормально-фазовая изократическая ВЭЖХ жирорастворимых витаминов: закономерности удерживания, оптимизация состава подвижной фазы и разработка аналитических методик

• Автор: Замуруев, Олег Викторович
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 197 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

1. Литературный обзор

1.1. Общая характеристика жирорастворимых витаминов

1.2. Основные мооды определения и обнаружения жирорастворимых витаминов

1.2.1. Биологические, биохимические, химические, оптические и электрохимические методы

1.2.2. Хроматографические методы

1.3. Нормальнофазовая высокоэффективная жидкостная хроматография

1.3.1. Сорбенты

1.3.2. Подвижные фазы

1.3.3. Закономерности и модели удерживания

2. Эксперимен тальная часть
2.1. Цель и задачи исследования
2.2. Объекты, реактивы, аппаратура и расчет параметров разделения
2.3. Изотермы адсорбции жирорастворимых внтамнноз из нгекеана и их коэффициенты распределения
2.4. Измерение дипольных моментов и расчет кршерисв тилрофобиости
2.5. Квантовохимические расчеты строения молекул витаминов
3. Разделение витаминов групп А. I. Е. К в нормальнофазовой ВЭЖХ
3.1. Элюирование игексаном и его бинарными смесями с полярными растворителями
3.2. Многопарамстрнческая оптимизация состава трехкомпонентной подвижной
3.3. Анализ более сложных смесей витаминов
4. Определение жирорастворимых витаминов в объектах пищевой, фармацевтической и парфюмерной промышленности
4.1. Расчет градуировочных уравнений и определение предела обнаружения
витаминов
4.2. Определение витаминов групп А, Е и О в поливитаминных
фармацевтических препаратах
4.2.1. Определение витаминов в поливитаминных препаратах с водорастворимой матрицей
4.2.2. Унифицированная методика определения витаминов в поливитаминных препаратах
4.3. Определение витаминов групп А, Е и Э в косметических кремах
4.4. Определение витаминов групп А и Е в продуктах детского питания
4.5. Определение витаминов групп А, Е и О в мягких маслах
4.6. Определение витамина Е в маслах растительного происхождения
Выводы
Литература


Несмотря на относительную простоту и невысокую стоимость, низкие пределы обнаружения до нескольких нгмл и хорошую воспроизводимость, оптические методы обладают рядом существенных недостатков невозможность одновременного определения витаминов групп Л. Е, К. О при их совместном присутствии о анализируемых пробах необходимость предварительных стадий очистки и разделения для устранения мешающих оптически активных примесей снижение точности и воспроизводимости результатов при получении оптически активных производных. Электрохимическим методам определения и обнаружения ЖРВ в аналитической химии уделяется большое внимание, для них характерны , низкие пределы обнаружения вплоть до мольл, высокая селективносш для злектроактнвных веществ и воспроизводимость результатов измерений, экспрсссность проведения анализа. Однако, не все ЖРВ злектроактивны. Перевод витаминов в форму, обеспечивающую электрохимическое детектирование, требует дополнительных стадий химического превращения. Хроматографические методы анализа занимают ведущее положение среди Методов исследования и определения жирорастворимых витаминов в синтетических и природных субстратах табл. Наибольшее распространение получили тонкослойная, газожидкостная п высокоэффективная идкосгная хроматография. Ограничения при использовании метода ТСХ связаны с длительностью анализа, что существенно при анализе лабильных ЖРВ . Ниже представлены типичные примеры определения витаминов с помощью тонкослойной хроматографии. Предложена методика определения витамина К в печени крупного рогатого скота. Пробы печени гомогенизируют, витамин экстрагируют ным спиртом и смесью нгексанхлороформ 5. Очистку экстрактов проводят на колонке с ПопяП. К петролейным эфиром и смесями 8 и диэтиловмй эфирпетролейный эфир, а также на мнкроколонке БерРак подвижная фаза метанол. Содержание витамина К. УФсвегс, используя пластинки для ТСХ с обращенными фазами подвижная фаза дихлорметанмстанол . Минимально найденное содержание составило 0. С использованием готовых пластин силуфол СУ 4 и 0 со слоем целлюлозы, проведено определение витамина К. В качестве подвижной фазы применяли смесь СНзОН и СЧН 5. Для проявления пятен пластины обрабатывали спиртовыми растворами анилина, бензидина. Наиболее низкое значение предела обнаружения досгитнуто на пластине СУ 4 с проявителем анилин 0. Общее время анализа около 2 часов. Показана возможность определения витаминов О и Рз с помощью ГСХ. Образен растворяют в хлороформе, полученный раствор наносят на пластину с закрепленным слоем сорбента и элюируют подвижной фазой мгсксан диэтиловый эфир нбутаиол 2. Методом ГСХ высокого давления исследован состав экстрактов из красного перца на содержание каротинондов . Остаток растворяют в 1 мл бензола, наносят на пластинку с силикагелем Р к хроматографируют при давлении 1. МПа, злюентом петролейный эфирбснзолацетонуксусная кислота 22. ВЭЖХ. Ограничения использования метода ГЖХ при анализе природных и синтетических ЖРВ связаны с низкой летучестью и термической нестойкостью раздел 1. Поэтому при анализе витаминов с помощью ГЖХ обязательной стадией является получение летучих и лабильных производных ЖРВ. Предложена методика определения ретинола и атокоферола в тканях домашней птицы, включающая экстракцию липидов, омыление, очистку методом твердофазной экегрзкции на колонке с силикагелем, элюирование смесью лгександнэтнловый эфир . ЖХ на колонке м к 0. ДВ5 5 феннлмегиленликона и детектированием ДНИ детектор пламенноноиизационкый. Внутренний образец сравнения 5ахолссган Продолжительность разделения мин. Степень извлечения после стадии омыления . Абсолютная степень извлечения из образцов тканей . Относительная степень извлечении более . Предел обнаружения по ретинолу равен I мкгг. При определении Иатокоферола и его ацетата в различных фармацевтических объектах и хачестве неподвижной фазы применяли диметнл или фнилметилполиснлоксаны ОУ, Е. ЗН1,4бснзодиазспин2она или кодеина . Разделение проводили на колонке 2 м х 3 мм содержащей неподвижной фазы на Хроматонс чАУ и температуре 0 сС, при расходе Не млмин.