Цитотоксическая и иммуномодулирующая активность высокоэффективных ингибиторов белкового синтеза

• Автор: Бугхлала, Самира
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : ил.

Оглавление
Введение

1. Обзор литературы

1.1 .Молекулярные механизмы активации лимфоцитов

1.1.1. Мембранные изменения при активации лимфоцитов

1.1.2. Роль кальция в активации лимфоцитов

1.1.3. Система внутриклеточных посредников в активации лимфоцитов

1.2. Цитогоксическое противоопухолевое действие лимфоцитов

1.3. Общая характеристика и механизмы активация тромбоцитов

1.3.1. Противоопухолевая цитогоксичность тромбоцитов

1.4. Токсические растительные токсины

1.4.1. Токсически лекгины гісшш-соїтатшій
1.4.2. Сіруктура и специфичность углеводсвязывающих центров В-субьединицы токсических лектинов
1.4.3. Ферментативная активность каталитических субъединиц
1.4.4. Связывание с клеточной поверхностью
1.4.5. Интернализация токсических лектинов
1.4.6. Внутриклеточный путь токсинов
1.5. Иммунноконьюгагы
1.5.1. Переносчики и цитотокеические агенты для элиминации
опухолевых клеток
1.5.2. Использование МАТ в составе конъюгатов с различными соедининиями
1.5.3. Иммунотоксины
1.5.4. Способы повышение эффективность иммунотоксинов
1.6. Физиологическая гибель клеток
2. Материалы и методы исследования
2.1 Выделение мононуклеарных клеток
2.2 Выделение тромбоцитов

2.3 Активация мшонукяеаржьіх клеток
2.4. Функциональные исследование тромбоцитов
2.5 Определение цитогоксической активности клеток
2.6 Использование иммуноферментативнсго анализа для определения уровня цитокинов в супернатантах, сттшулированных мононуклеаряьтх клеток
2.7 Выделение белков из супернатантов МНК
2.7.1 Фракционирование белков по молекулярным массам с помощью центрифугирования с использованием мембран
2.7.2 Высокоэффективная жидкостная хроматография белков
2.7.3 ДСН - .электрофорез белков и элекгроблоттинг
2.7.4 Сканирование белков I7
2.7.5 Определение N-концевой амин окисленной последовательности белков
2.8. Определение нуклеосомальной фрагментации клеток мишеней
2.9. Исследование пролиферации клеток по включению [ЗЩшмидина
3. Результаты и обсуждение
3.1. Повышение эффективности иммунотоксин?. ВТ А/ВЗР7
3.2. Прямая противоопухолевая цитотоксичность разных тсксинов на К562
3.3. Определение цитотоксичностгт монснукяеарных клеток после их активации ргазными токсинами и конъюгатами в концентрациях не вызывающих тибель опухолевых клеток линии К562
3.4. Тестирование цитокинов в супернатантах стимулированных рицином
мононукяеарюв
3.5. Сравнение цитотоксичносгь мононуклеаров стимулированных разными
факторами (ФГ А, КОН-А, Са-ионофор>А23187 и рицтш)
3.6. Цитотоксичеекая активность тромбоцитов человека, стимулированных различными экзогенными агентами
3.7. Функциональные исследованиятрембоцнтов, сттяулированных различными
экзогенными агентами
3 8. Сравнение щттогокеичности мононуклеаров и тромбоцитов, стимулированных рицином и Са-ионофором

3.9. Исследование супернатантов мснонуклеаров, активировшшых разными факторами
3.10. Исследование биологической активности р14 86 3.11 Тестирование нуктеосомальной фрагментация ДНК мононуклеарных
Клеток
Зактиочение
Выводы
Список литературы

В качестве эффекторных агентов наряду с растительными токсинами используются различные химиотеравпетические препараты, цитокины. В настоящее время синтезировано значительное количество препаратов, в которых в качестве активной части молекулы используются РИБ-2 типа или их каталитические субъединицы.
1.5.3. Иммунотоксины на основе токсических лектинов.
РИБ2 типа были успешно применены в создании химерных молекул -иммунотоксинов, которые были предложены для терапии онкологических и аутоиммунных заболеваниях, а также при транс плантации органов и костного мозга. В настоящее время синтезировано значительное количество препаратов, в которых в качестве активной части молекулы используются РИБ2 типа или их каталитические субьединицы. Конъюгаты на основе интактных токсинов обладают гораздо большей цитотоксической активностью, чем таковые А- субьединицы токсинов.
Значительной проблемой в клиническом использованием ИТ является их быстрая элиминация из кровотока [89]. Это происходит, в основном, посредством взаимодействия олигосахаридов токсической части ИТ с клетками печени. С этой целью в ИТ используются химически (-ферментативно ) дегликозилированные или рекомбинантные А- цепь рицина. Это связано, в основном, с большей доступностью рицина для исследований. Активность каталитических субьединиц РИБ2 типа в безклеточных системах практически одинакова [9]. Между тем, цитотоксичность коньюгатов, в которых использовалась А-цепь различных РИБ 2 типа, различалась в 10 раз и более [5]. Этот факт отражает различную способность А- цепь токсических лектинов к транслокационному переносу.
Перспективным направлением в получении высокоэффективных цитотоксических коньюгатов, является создание т.н “генетических” иммунотоксинов. Такие ИТ состоят из плазмидной ДНК, несущей ген токсина, и бифункционального рекомбинантного АТ-ДНК связывающего белка, функция которого заключается в том, чтобы направить ген, экспрессирующий токсин. Сконструированные подобным образом ИТ обладает незначительной