Экспрессия биомаркеров при раке молочной железы

• Автор: Лукашина, Марина Игоревна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 134 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ Страница

Введение

Роль молекулярно-биологических маркеров

при раке молочной железы

Рецепторы стероидных гормонов

Плоидность

Пролиферативная активность

Рецептор эпидермального фактора роста (Her- 2/neu)

Взаимосвязь экспрессии Her-2/neu и

гормональной терапии

Взаимосвязь экспрессии Her-2/neu и

цитотоксической терапии
Опухолевый ангиогенез
Фактор роста эндотелия сосудов (VEGFa)
Тирозин-киназные рецепторы (VEGFR1, VEGFR2)
Прогностическое значение IFGF и его рецепторов
Тшшдин фосфорилаза
Методы определения биомаркеров
Материалы и методы исследования
Результаты исследования
Иммуногистохимическое исследование
Сравнение статуса рецепторов эстрогенов,
определяемого разными методами
Сравнение ИГХ и ИЦХ методов
определения биомаркеров
Иммуноцитохимическое исследование
Исследование содержания ДНК в опухолевых клетках и
распределение их по фазам клеточного цикла
Экспрессия маркеров ангиогенеза в зависимости от плоидности опухолевых клеток и их
распределения по фазам клеточного цикла
Обсуждение
Выводы
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БРВ - безрецидивная выживаемость
БСА - бычий сывороточный альбумин
ДИР - инфильтративный долысовый рак
ИГХ - иммуногистохимическое определение биомаркеров
ИДНК - индекс плоидности
ИП - индекс пролиферации
ИIIX - иммуноцитохимическое определение биомаркеров
МКА - моноклональные антитела
ОВ - общая выживаемость
ПИР - инфильтративный протоковый рак
ПКА - поликлональные антитела
ПЦР - полимеразно-цепная реакция
РМЖ - рак молочной железы
РП - рецепторы прогестерона
РЭ - рецепторы эстрогенов
ТФ - тимидин фосфорилаза
DAB - 3’3-диаминобензидин
EGFR - рецептор эпидермального фактора роста
FISH - флуоресцентная in situ гибридизация
Her-2/neu - рецептор эпидермального фактора роста
PBS - фосфатно-солевой буфер
TNF-a - фактор некроза опухолей-а
VEGF - фактор роста эндотелия сосудов
VEGFR - рецептор фактора роста эндотелия сосудов
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы исследования
Рак молочной железы (РМЖ) в России, а также в странах Европы и Америки, занимает первое место в структуре онкологических заболеваний среди женщин [Трапезников H.H., Аксель Е.М. 1998]. РМЖ является основной причиной смерти женщин в возрасте 15-54 лет. При лекарственной терапии опухолей молочной железы регрессия наблюдается в 50-80% случаев, но остается проблемой достижение полных ремиссий, которые составляют 10-40%, а также резистентность опухолей к проводимой химио- и гормональной терапии.
Исследования по проблеме рака молочной железы занимают одно из ведущих мест в современной онкологической науке. Концентрация усилий в этом направлении привела к тому, что за последние годы существенно расширились представления об особенностях биологии рака молочной железы, идентифицирован ряд характерных генетических изменений. Определение геномных нарушений, определяющих развитие опухоли, степень ее злокачественности, метастатический потенциал и скорость прогрессии, является приоритетной областью молекулярно-генетических исследований в современной онкологии.
В настоящее время активно изучаются различные молекулярнобиологические факторы, которые подвергаются изменениям при развитии и прогрессии злокачественных новообразований, среди них Her-2/neu (с-егЬВ-2), Ki-67, BCL-2, р53 и др. Исследование этих параметров, изучение их роли в канцерогенезе, возможно, позволили бы прогнозировать течение заболевания, определять отдаленные результаты, а также предсказать ответ на цитотоксическую и гормональную терапию.
При РМЖ амплификация Her-2/neu гена и/или гиперэкпрессия его белковых продуктов наблюдается в 20 - 40% случаев [Press MF et al 1993, Charpin С et al 1997, Ross JS et al 1998, Depowski PL et al 1998]. Гиперэкспрессия Her-2/neu ассоциируется с более агрессивным течением

использовать как на замороженных, так и на фиксированных в формалине, заключенных в парафин срезах. ИГХ метод определения пролиферативной активности по экспрессии Ki-67 имеет такие же недостатки, что и описанные выше для РЭ.
Разработан ряд методов для определения Her-2/nen статуса опухолей. В качестве молекулярных мишеней в разных случаях используют DNA, RNA или рецепторные белки. Твердофазные матриксные анализы (Southern blot, Northern blot, Western blot) используют как стандартные исследовательские методы на начальных этапах разработок и не применяют в клинической практике. Они трудоемки, дороги, требуют специальной подготовки и оборудования. Для проведения анализа этими методами необходимы образцы свежей или замороженной ткани; архивный материал использовать нельзя.
Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) можно использовать для определения статуса Her-2/neu. Этот метод автоматизирован и требует небольших образцов ткани, но его применение ограничивается полуколичественной оценкой результата. Разработка количественного ПЦР могла бы устранить этот недостаток. В 1999 г. две исследовательские группы Okuyama и соавт. (1999) и Vona и соавт. (1999) опубликовали результаты тестирования Her-2/neu количественным методом ПЦР. Полученные при этом данные коррелировали с другими исследованиями по оценке Her-2/neu статуса, где были использованы другие методы анализа. Дальнейшая адаптация ПЦР к практическим задачам, позволит широко использовать этот метод в клинической практике.
Экстрацеллюлярный домен Her-2/neu рецептора может отщепляться,
слушиваться с клеточной поверхности и циркулировать в кровотоке.
Методом фермент-связанного иммунносорбентного анализа
экстрацеллюлярный домен может быть измерен в крови. Это простой,
доступный и очень привлекательный метод определения Her-2/neu статуса.
Однако корреляция между циркулирующим экстрацеллюлярный доменом и