Скрининг гена лейкоцитарной адгезии (BLAD-синдром) у животных черно-пестрого корня крупного рогатого скота

• Автор: Игнатьев, Владимир Михайлович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: п. Дубровицы, Московской обл.
• Количество страниц: 96 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1, Обзор литературы

1.1 Молекулы клеточной адгезии человека и животных

1.2.Суперсемейство садектинов В

1.3. Суперсемейство иммуноглобулинов

1.4.Суперсемейство кадхеринов

1.5. Суперсемейство интегринов

1.5.1. ßi-семейство

1.5.2. -семейство

1.5.3. ß3- семейство

1.5.4. Лиганды ннтегриновых молекул
1.5.5. Регуляция экспрессии интегриновых молекул
1.5.6. Сигнальные функции интегринов
1.6.Дефицит лейкоцитарной адгезии у человека (LAD- 21 синдром)» собак, мышей
1.7.Дефицит лейкоцитарной адгезии (BLAD-онндром) у черно- 25 пестрого корня крупного рогатого скота
1.8.Наследование гена BLAD и краткая характеристика его 30 распространения
ГЛАВА 2. Материалы и методы исследований
ГЛАВА 3, Результаты собственных исследований
3.1 .Реактивы для выделения ДНК и проведения ПЦР
3.2.Приборы и материалы
3.3.Буферы и растворители
3.4.Методы выделения ДНК
3.4.1 .Фенольно-хлороформовый метод
3.4,2,Метод солевой экстракции

3.4.3.Метод Кавасаки
3.4.4.Метод выделения ДНК из елермы
3.5. Анализ методов выделения ДНК
3.6. Определение концентрации ДНК
3.7. ПЦР-анализ с различными типами праймеров для диагностики гена BLAD-синдрома у черно-пестрого корня
крупного рогатого скота
3.7.1.Применение ПЦР-акаляза для выявления гена BLAD-синдрома с использованием праймеров Ivan2 и Ivan3
3.7.2.Применение ПЦР-анализа для выявления гена BLAD-снндрома с использованием праймеров 12.4 и
3.8. Миграция и поток гена BLAD в популяциях чернопестрого корня крупного рогатого скота в различных странах 53 мира
3.9. Анализ родословных быков-производителей носителей гена BLAD-синдром
3.10. Характеристика продуктивности дочерей быков-произво- 69 дитепей, носителей гена BLAD
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. У различных видов и пород крупного рогатого скота описано боя ее 200 наследственных заболеваний (Lidauer, 1992). Быстрота и точность диагностики многих из них значительно повысилась благодаря достижениям молекулярной генетики, развитию молекулярно-генетических методов регистрации полиморфных локусов ДНК и мутационных изменений, созданию эффективных ДНК-диагностических процедур (Евграфов О,В,, 1992; Горбунова В.Н.» Баранов В.С,, 1997),
В литературе отражена большая группа молекул клеточной ад-
Г Г Г JT J
гезии, вызывающих морфологические изменения в раннем эмбриогенезе и в органо - и гистогенезе (Боценовский В.А., Барышников А.Ю., 1994), Их принято делить на 4 суперсемейства: се-яектины, иммуноглобулины, кадхерины и интегрины. Особую роль играют интегрины - поверхностные клеточные белки, запускающие адгезию клеток путём взаимодействия с различными белками матрикса. Они обеспечивают интеграцию между внутриклеточным цитоскелетоном и зкстрацеллюлярным матриксом. Интегрины лейкоцитов, как и другие молекулы адгезии, играют ведущую роль в осуществлении важнейших функций лейкоцитов (Bauer-Sic, 1963), Прежде всего, это миграция лейкоцитов из крови в ткани. Интегрины участвуют в агрегации тромбоцитов, им-му 'НОЛ огиче СКЯХ Пр ОЦ£ С С В О ООТЕКОБД £ II If v ТКЕНЕЙ при ранениях
в ряде процессов диффереяцировки, пре- и л о с т н а т а л ь н о м развитии
Мутации генов интегринов лежат в основе заболеваний у животных. Дефицит лейкоцитарной адгезии (Bovine Leucocyte Adhesion Deficiency), или В LAD-синдром крупного рогатого скота - наследственная аутосомная болезнь рецессивного тина, обусловленная точковой мутацией в гене, кодирующем CD 18 (бета-субъединица бета-два интегрина), что приводит к замене ас-пара-
ДНК от двух животных соответственно гомозиготных и гетерозиготных но данному рецессивному гену из отдела разведения и генетики животных (Ганновер, Германия), любезно предоставленные доктором Барбарой Харнициус. Оценку результатов эдек-. трофореза проводили после окрашивания гелей бромистым эти днем под ультрафиолетовым излучением ка трансиллюмикаторе.
Цифровые материалы обрабатывали по формулам, описанным Плохинским Н. А.(1978), Марзан об ым Н.С. (1991) с применением общепринятых программ персонального компьютера 1ВМ РС.
ГЛАВА 3, Результаты собственных исследований
Исследовали образцы крови, свежеполученную и глубокозамо-роженную сперму, взятую от 176 животных черно-пестрого корня. Взятые пробы клинического материала в настоящее время хранятся в замороженном состоянии в морозильной камере марки "Стинол" при -20° С.
Для экстракции ДНК использовали пробы крови с консервантом, широко используемого для изучения групп крови различных видов животных. С целью выделения ДНК из крови и спермы были апробированы 4 метода: фенольно-хлороформовый (Blin,
Stafford, 1976) в модификации Ansubel et ai. (1987), солевой экстракции (Miller et al., 1988) и Kawasani (1990), a из спермы модифицированный метод Li et al. (1988).
3,1, Реактивы для выделения ДНК н проведения ПЦР
Использованные реактивы фирм «Fermentas», «Serva», «Диа-М», «Sigma» соответствовали стандарту качества. В работе применяли следующие химреактивы: