Получение, определение и свойства фактора XII плазмы крови человека

• Автор: Блохина, Татьяна Будимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Место защиты: Б. м.
• Количество страниц: 119 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Участие фактора ХП в регуляции активности протеолити-

ческих систем плазмы крови

1.2. Контактная система активации протеолиза

1.2.1. Струюурно-функциональные свойства факторов контактной системы

1.2.1.1. Фактор ХП свертывания крови

1.2.1.2.Высомолекулярный кининоген

1.2.1.3.Прекалликреин и калликреин плазмы крови
1.2.1.4. Фактор XI свертывания крови
1.2.2. Механизм активации контактной системы на полианионной поверхности
1.2.3. Новая концепция активации контактной системы на
поверхности эндотелиальных клеток
1.3. Методы выделения и определения фактора ХП
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.2.1. Химические и кинетические методы
2.2.2. Физико-химические методы
2.2.3. Математические методы анализа полученных результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение, очистка и характеристика очищенных препаратов
фактора XII и его фрагмента - (5-ХПа из сыворотки крови человека
3.1.1. Метод очистки фактора ХП, Р- ХПа и прекалликреина
3.1.2. Физико-химические и энзиматические свойства фактора ХП,
Р- ХПа
3.2. Изучение механизмов активации фактора XII
3.2.1. Автоактивация фактора ХП
3.2.2. Действие активаторов плазминогена, входящих в состав лекарственных средств на фактор ХП и прекалликреин
3.3. Разработка метода одновременного определения фактора ХП, прекалликреина и их активных форм в плазме крови человека
с использованием хромогенных субстратов
3.4. Активность и роль фактора ХП и других компонентов контактной системы активации протеолиза при патологии
3.4.1. Действие эластазы из полиморфноядерных лейкоцитов на фактор ХП и другие компоненты контактной системы активации протеолиза
3.4.2. Определение фактора ХП, прекалликреина, и их активных форм при перитонитах
3.4.3. Определение фактора ХП, прекалликреина, и их активных
форм при миелобластном лейкозе
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений.
BocAlaONp - N-tert-бутокси-карбонил-аланин-п- нитрофениловый эфир MSAAPVpNA - метокси-сукцинил-аланил-аланил-пролил-валин-п-нитроанилид БАЭЭ - N-бензоил-Ь. -аргинин-этиловый эфир aj-ПИ - ai-протеиназный ингибитор
S-2302 - Н-D-Proly-L-phenylalanyl-L-arginine-p-nitroaniline dihydrochloride “Chromozym РК”- Benzoyl-prolyl- phenylalanyl-4-arginine-p-nitranilide-acetate ПААГ - полиакриламидный гель ДС-Na - додецилсульфат натрия ДС - декстран сульфат
ЛЭ - эластаза из полиморфноядерных лейкоцитов ПК - прекалликреин К - калликреин
ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты ККС - калликреин-кининовая система КСА - контактная система активации ВМК - высокомолекулярный кининоген
процессом на многих клетках, когда комплекс ПК с ВМК связывается с их мембранами Изучение кинетики активации ПК и фактора XII на эндотелиальных клетках показало, что активация ПК является первым этапом физиологической активации ККС на энлотелиошггах Активация фактора XII происходит только после активации ПК
Модель, демонстрирующая основные события активации ККС на клеточной поверхности эндотелиацитов, представлена на рис. 6.
Рис 6 Модель активации ККС на эндотелиальной клетке (по Rojkaer & Schmaier, 1999) Объяснения в тексте
Итак, благоприятные условия активации ККС создаются при образовании полибелкового ансамбля на поверхности эндотелиальной клетки, в состав которого кроме ВМК и ПК входягт рецептор активатора плаэминогена урокиназного типа (uPAR), рецептор q-субъединицы первого компонента комплемента (gClqR), фактор XII и цитокератин 1 (Herwald et al., 1996; 100 Dedk) & Mueller-Esterl, 1996, Dedio et al., 1998, Van den Berg et al, 1998). В этом комплексе ПК активируется под действием связанной с мембраной цистеиновой протекназы (МР) с образованием калликреииа, который в свою очередь активирует фактор XII. Калликреин расщепляет ВМК, при этом генерируется брадиюшин, и комплекс дехининированного ВМК с калликреином фактора XIIа снимаются с поверхности эндотел но цитов Данная новая гипотеза активации ККС