Влияние липопротеидов на сигнальные и транскрипционные системы клеток крови и сосудистой стенки

• Автор: Бочков, Валерий Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 265 с. : ил.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Липопротеиды плазмы крови и нарушения липидного обмена.

Механизмы атерогенеза

Окисленные фосфолипиды.

Влияние липопротеидов на системы передачи регуляторных сигналов в

тромбоцитах и клетках сосудистой стенки.

МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. АКТИВИРУЮЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ЛИПОПРОТЕИДОВ ПА СИСТЕМЫ ВТОРИЧНЫХ ПОСРЕДНИКОВ В ТРОМБОЦИТАХ И ГЛАДКОМЫШЕЧНЫХ КЛЕТКАХ ГМК СОСУДОВ
1.1. Влияние ЛНГ1 на внутриклеточные системы обмена кальция и фосфоинозитидов в тромбоцитах человека.
1.2. Влияние ЛНП на внутриклеточные сигнальные системы обмена кальция и фосфоинозитидов в ГМК сосудов.
1.3. Заключение
2. ПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ И ГИПЕРТРОФИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ЛИПОПРОТЕИДОВ АКТИВАЦИЯ СИНТЕЗА ДНК И БЕЛКА В ГМК СОСУДОВ
2.1. Результаты
2.2. Заключение
3. РОЛЬ ЛИПОПРОТЕИДНЫХ РЕЦЕПТОРОВ И ЛНПСВЯЗЫВАЮЩИХ УЧАСТКОВ В АКТИВИРУЮЩЕМ ДЕЙСТВИИ ЛИП НА СИСТЕМЫ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ СИГНАЛИЗАЦИИ
3.1. Исследование роли ранее описанных липопротеидных рецепторов в
развитиии сигнальных эффектов ЛНП.
3.2. Характеристика новых участков связывания ЛНП
на ГМК сосудов
3.3. Заключение
4. ТКАДГЕРИН НОВЫЙ ЛНПСВЯЗЫВАЮЩИЙ МЕМБРАННЫЙ РЕЦЕПТОР
4.1. Характеристика ЛНПсвязывающих белков ГМК методом
лигандного блоттинга.
4.2. Выделение и идентификация ЛНПсвязывающих белков ГМК
как Ткадгерина и его частично процессированного посредника.
4.3. Влияние Ткадгерина на межклеточную адгезию
и связывание липопротеидов с клетками.
4.4. Экспрессия Ткадгерина в органах и тканях
4.5. Локализация Ткадгерина в кавеолярной фракции.
4.6. Заключение
5. ВЛИЯНИЕ ОКИСЛЕННЫХ ЛИПИДОВ НА СИГНАЛЬНОТРАНСКРИПЦИОННЫЕ МЕХАНИЗМЫ АТЕРОТРОМБОЗА
5.1. Роль окисленные эфиров холестерина в инициации сосудистого
воспаления
5.2. Роль изопростанов в инициации сосудистого воспаления
5.3. Протромбогенное действие окисленных фосфолипидов на
эндотелиальные клетки транскрипционные механизмы индукции тканевого фактора свертывания.
5.4. Заключение
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ .
ЦИТИРОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
БСА бычий сывороточный альбумин
ГМК гладкомышечные клетки
ГФИ гликозилфосфатидилинозитол
ДМСО диметилсульфоксид
ЛП липопротеиды
1X линолеат холестерина
МмЛНП минимально модифицированные ЛНП
ОкЛНП окисленные ЛИП
ОкЛХ окисленный линолеат холестерина
ОкФЛ окисленные фосфолипиды
9ОНХ 9оксононаиоилхолестерин
ПКС протеинкиназа С
ПГЕ1 простагландин i
СГХС семейная гиперхолестеринемия
ТФ тканевой фактор свертывания
ТХУ трихлоруксусная кислота
ФЛС фосфолипаза С
ЭДТА эти ленд нами нтетраацетат
ЭК эндотелиальные клетки
аденозиндифосфат
1фиброиектии вариант сплайсинга фибронектииа, содержащий фрагмент i
i , фактор роста фибробластов
x i i, внеклеточные домены кадгеринов
i , эпидермальный фактор роста
ii i, белок, родственный ЛНПрецептору
ОхРАРС xii РАРС, окисленный РАРС
ФАТ фактор активации тромбоцитов
iv , тромбоцитарный фактор роста
iii, пальмитоилппотароилфосфатидилхолин
i , форболмиристатацетат
i, феиилмстилсульфонилфторид
iiii, пальмитоиларахидоноил
фосфатидилхолин
i , додецилсульфат натрия
i , трансформирующий фактор роста бета
iixi, трисгидроксиметиламинометан
ВВЕДЕНИЕ


Повидимому, в участках ветвления артерий в результате изменений динамики кровотока нарушаются эндогенные атеропротективные механизмы. Помимо эндотелиальной синтазы, еще целый ряд генов, обладающих потенциально атеропротективиыми свойствами, содержат в промотерных районах участки, чувствительные к напряжению сдвига. Например, супероксиддисмутаза экспрессируется на более высоком уровне в участках ламинарного тока, где она нейтрализует окислительный стресс и таким образом ограничивает экспрессию V1 и другие воспалительные механизмы , . Первичным процессом в экстравазации лейкоцитов является активация . Нормальный эндотелий обычно не связывает лейкоциты. Тлимфоциты. Выход моноцитов регулируется несколькими типами молекул клеточной адгезии. Одной из таких молекул, повидимому, является V 1, которая экспрессируется на эндотелиальных клетках в участках, подверженных развитию атеросклероза. Рселектин, о чем свидетельствует снижение атеросклероза у мышей с тройным нокаутом по апо Е, Е и Рселектину. Подобным образом, нокаут по I1 приводит к небольшому, но достоверному снижению выхода моноцитов в атеросклеротические сосуды у апо Енокаутированных мышей. Хроническое введение пептидомиметика, соответствующего 1домену фиброиектина 1, который блокирует функцию адгезионной молекулы V4 на поверхности лейкоцитов, снижало накопление липидов в сосудах мышей, получавших атерогенную диету i, . Суммарно приведенные данные показывают, что выход моноцитов и Тклеток в атеросклеротические участки сосудов опосредуется целым рядом молекул клеточной адгезии. Нейтрофилы, обычно присутствующие при большинстве типов воспаления, в атеромах отсутствуют. Механизмы исключения нейтрофилов пока неизвестны. Одним из главных хемокинов, опосредующих экстравазацию лейкоцитов является МСР1. Нокаут генов МСР1 или его рецептора 2 заметно снижает развитие атеросклероза у мышей с гиперхолестеринемией , i, . Повидимому, определенную роль играет также I8 и его рецептор X2. В атероме также повышена экспрессия других хемокинов, которые могут иметь отношение к рекрутированию лимфоцитов, в том числе СХС хемокины, индуцируемые I , . Миграция моноцитов в артериальную стенку, повидимому, частично стимулируется окЛНП, который обладает способностью непосредственно привлекать моноциты, а также способен индуцировать экспрессию таких хемокинов как 1. Одним из цитокинов, стимулирующих превращение моноцитов в макрофаги, является макрофагальный колониестимулирующий фактор М. М усиливает экспрессию скевенджеррецептора А, повышает производство цитокинов и факторов роста макрофагами, а также выступает в роли антиапоптозного и комитогенного стимула. Экспрессия повышена в атеросклеротических бляшках человека и животных i, . Гранулоцитарныймакрофагальный колониестимулирующий фактор также может вносить вклад в воспалительную реакцию в атероме. Образование из макрофагов пенистых клеток является характерной чертой ранних и поздних стадий атеросклероза. Накопление холестерина в этих клетках опосредуется главным образом захватом модифицированных форм ЛНП с помощью так называемых скевеиджеррецепторов. Распознавание окЛП скевенджеррсцепторами опосредуется, по крайней мере отчасти, окисленными фосфолипидами как в липидной фазе, так и в виде ковалентных аддуктов на апо В0 , . Хотя в суммарный процесс вносят вклад несколько рецепторных белков, скевенджер рецепторы и играют основную роль. Об этом свидетельствует значительное уменьшение размера бляшек у апо Едефицитных мышей, скрещенных с нокаутами по и СЮ i, i. Холестерин, входящий в состав окЛНП и попадающий в макрофаги с помощью скевеиджеррецепторов, состоит из свободного холестерина и эфиров холестерина, которые гидролизуются в лизосомах. В дальнейшем свободный холестерин может эстерифицироваться ацилСоА холестеринацилтрансферазой и храниться в виде липидных капель, характерных для пенистых клеток. Эфиры холестерина в этих каплях, в свою очередь, могут гидролизоваться гормоичувствительной липазой с образованием свободного холестерина, который включается в мембраны или транспортируется из клетки.