Структурно-функциональная организация 5 '- концевого участка гена СД4 рецептора

• Автор: Сидоров, Александр Викторович
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1996
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 135 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Структура и функции

СЭ4 рецептора Т-лимфоцитов человека

Глава 1. Структурная организация СИ4 рецептора

Глава 2. Функциональное значение СИ4 рецептора

Глава 3. Роль СИ4 рецептора в патогенезе

ВИЧ-инфекции

3.1. Молекула С04 - рецептор ВИЧ

3.2. Взаимодействие СЭ4 рецептора с ВИЧ

3.2.1. Локализация участков взаимодействия

ВИЧ с чувствительными клетками
3.2.2. Локализация участка молекулы СЭ4,
ответственного за связывание с ВИЧ
генетического суперсемейства белков,
родственных иммуноглобулинам
4.1. Основные характеристики белков,
родственных иммуноглобулинам
4.2. Основные группы белков, родственных
иммуноглобулинам
4.3. Структурно-функциональная организация
генов мембранных рецепторов, относящихся
к суперсемейству иммуноглобулинов
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Материалы
2. Методы

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Клонирование кДНК СЭ4 рецептора
2. Определение нуклеотидной последовательности
клонированной кДНК гена СИ4 рецептора
3. Клонирование фрагментов гена СИ4 рецептора
4. Определение нуклеотидной последовательности
клонированного участка гена СИ4 рецептора
5. Интрон-экзонная организация 5’-концевого
участка гена С04 рецептора
6. Регуляторные элементы гена СИ4 рецептора
6.1. Анализ промоторной области гена
СЭ4 рецептора
6.2. Характеристика ретротранспозона,
локализованного в гене СЭ4 рецептора
6.3. Анализ А1и-повторяющихся элементов
в гене СИ4 рецептора
7. Локализация гена СИ4 рецептора на хромосомах клеток моноцитоидной
линини ЕІ937
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА
ВВЕДЕНИЕ
Одним из наиболее опасных и быстрораспространя-ющихся в последнее время вирусных заболеваний является инфекция, вызываемая вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекция), получившая в фазе клинических проявлений название СПИД (синдром приобретенного иммунодефицита). Со времени появления этого заболевания число заболевших, по официальным данным на 1994 год, составляло более 3 миллионов человек, а число инфицированных ВИЧ превышало 15 миллионов человек. Этиологический агент СПИД - вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), относящийся к семейству ретровирусов (подсемейство ЬеЫтппае), был открыт в 1983 году. Специфической мишенью для этого вируса служат хелперные Т-лимфоциты, в которых происходит размножение вируса. Кроме того, показано, что моноциты и макрофаги также могут быть инфицированы ВИЧ.
Рецептором для ВИЧ на чувствительных к вирусу клетках служит СП4-диференцировочный антиген (Сй4 рецептор), с которым взаимодействует поверхностный гликопротеин р120 ВИЧ. Ключевая роль в процессе взаимодействия СЭ4 рецептора с gpl20 ВИЧ принадлежит первым двум имму-ноглобулинподобным доменам С04.
СИ4 рецептор экспрессируется на поверхности хел-перных Т-лимфоцитов (50-70% всех циркулирующих лимфоцитов), моноцитов и макрофагов. Этот гликопротеин играет важнейшую роль в антигензависимой Т-клеточной активации, участвуя, таким образом, в формировании клеточного иммунного ответа. Одним из главных свойств Т-лимфоцитов,

доменов молекулы CD4 (116-118). Позднее выяснилось , что ВИЧ-связывающий участок находится в первом домене CD4 (119-127). Этот регион в дальнейшем интенсивно исследовали с помощью олигонуклеотиднаправленного мутагенеза, а также используя моноклональные антитела и синтетические пептиды (126-129).
Jameson и соавт. (119) синтезировали пептид, пер-
вичная структура которого соответствовала фрагменту CD4 рецептора, расположенного между 36 и 53 а. к. Этот пептид ингибировал ВИЧ-индуцированное образование синцитиев в зависимости от используемой концентрации. Используя химеры мышь/человек (gpl20 связывается с человеческим CD4, но не с его мышиным аналогом), Landau и сотр. (120)
впоследствии показали, что gpl20-CBH3bmaioruHe свойства CD4 определяются регионом, составляемым 37-83 а. к. В результате этих и других экспериментов было найдено, что ВИЧ-связывающий сайт CD4 рецептора представлен
а. к. Peterson и Seed (121) исследовали взаимодействие с gp!20 ряда С04-мутантов, отобранных по их неспособности связываться с определенными анти-СЭ4 антителами. Было обнаружено, что связывающий gpl20 участок лежит между 42 и 49 а.к., что согласуется с результатами, приведенными выше.
Glayton и соавт. (122) также использовали химеры
мышь/человек для определения участка связывания CD4 с gpl20. С помощью олигонуклеотиднаправленного мутагенеза
они получили ряд рекомбинантных форм CD4 рецептора, в которых одна или несколько аминокислот были заменены с тем, чтобы получить аминокислотную последовательность