Особенности гуморального иммунного ответа к эндогенному интерферону при хронических гепатитах и циррозах печени

• Автор: Ефимова, Елена Эрнестовна
• Шифр специальности: 14.00.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Астрахань
• Количество страниц: 158 с. : 8 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Общее представление об иммуном ответе

1.2.Состояние системы интерферона в норме и при па

тологии печени

1.3. Особенности гуморального иммунного ответа к 25 эндогенному интерферону при различной патологии

ГЛАВА 2. Материалы и методы

2 .1-Методы исследования

2 .2 .Исследование концентрации апб1-ИФН-а и ИФН-а в
сыворотке крови
2.3.Определение противовирусной активности ИФН-а
в сыворотке крови
2.4.Клиническая характеристика обследуемых больных
2.5.Методы статистической обработки материала
ГЛАВА 3. Концентрация естественно образующихся анти
тел к ИФН-а и состояние системы ИФН-а при заболеваниях печени(результаты собственных исследований)
3.1. Концентрация естественно образующихся антител к 54 ИФН-а и состояние системы ИФН-а у больных хроническим гепатитом
3.2. Концентрация естественно образующихся антител к 74 ИФН-а и показатели интерферонового статуса у больных циррозом печени
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
• Апбі-ІЕТС-сх - естественно образующиеся антитела к ИФН
• ГМ-КСФ - гранулоцит/макрофаг колониестимулирующий фактор
• ГЦК - гепатоцеллюлярная карцинома
• ЕКК — естественные клетки киллеры ИЛ — интерлейкин
• ИФН-ск - интерферон-альфа
• ИФН-р - интерферон-бета
• ИФН-у — интерферон-гамма
• ЛПС - липополисахарид
• МЕ — международные единицы
• ОВГ - острый вирусный гепатит
• ОГС - острый гепатит С
• ПГ — портальная гипертензия
• ПФ - плазмаферез
• ФНО — фактор некроза опухоли
• ХГ - хронический гепатит
• ХВГ — хронический вирусный гепатит
• ХВГ В — хронический вирусный гепатит В
• ХВГ С — хронический вирусный гепатит С
• ХВГ О — хронический вирусный гепатит б
• ХДЗП — хронические диффузные заболевания печени ЦП — цирроз печени
• ЦПД - цитопатической действие, цитопатическая доза
• 1д - иммуноглобулины
• НЬА - антигены системы гистосовместимости
• НЬвАд — австралийский антиген
• Тії - Т-хелперы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы, В настоящее время среди заболеваний желудочно-кишечного тракта одну из наиболее актуальных проблем представляют хронические диффузные заболевания печени (ХДЗП). Прежде всего, это обусловлено их широкой распространенностью, прогредиентным течением, неясностью многих патогенетических механизмов развития, недостаточной эффективностью современной терапии. ХДЗП занимают первое место среди различных причин утраты трудоспособности и летальности у больных с заболеваниями желудочно-кишечного тракта [41,120]. В большинстве стран Европы, в том числе и в России, не только не отмечается снижения частоты летальных исходов при циррозе, но, напротив, наблюдается тенденция к ее увеличению. Ежегодно во всем мире от цирроза печени умирает более 300000 человек [26]
Известно, что течение и прогноз ХДЗП в значительной степени определяется состоянием иммунного статуса организма. Изучение иммунологических аспектов ХДЗП позволяет с новых позиций подойти к решению вопросов диагностики, прогнозирования и оценки эффективности лечения. На всех этапах иммунного ответа активное участие в нем принимает система цитокинов в целом и система интерферона в частности. Интерфероны являются ключевыми регуляторами не только защитных, но и многих физиологических процессов, протекающих в организме [14,15,22]. Однако многие аспекты функционирования системы интерферона остаются неясными, литературные данные, порой, носят противоречивый характер. Вероятно, это объясняется тем, что механизмы регуляции интерферонового ответа отличаются сложностью и мно-

Общую активность ИФН-а в сыворотке крови проводили по его противовирусной активности в культурах клеток L41 против 100 ТЦД 50 вируса везикулярного стоматита.
Большинство из перечисленных методов исследования хорошо известны и повсеместно используются в клинической практике. Ниже, более подробно описаны менее распространенные тесты.
2.2. Исследование концентрации antl-IFN-a,
ИФН-a в сыворотке крови
Концентрацию перечисленных молекул в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа с помощью стандартных тест-систем «Bender MedSystems» (Австрия) и «Протеиновый контур» (г.С-Петербург).
В наборах использовался метод ИФА с применением перокси-дазы хрена в качестве индикаторного фермента. Один тип моноклональных антител иммобилизован на внутренних поверхностях ячеек планшетов для микротитрования. Другой тип моноклональных антител к независимому эпитопу определяемой молекулы ци-токина находится в наборе в виде коньюгата с биотином. Индикаторным компоненом является коньюгат пероксидазы хрена со стрептавидином, имеющим очень высокое сродство к биотину.
Лунки микропланшета дважды промывают, внося по 250 мкл буфера для промывки в каждую лунку и проводя полную аспирацию жидкости. Затем разбавляют 1:20 необходимое для анализа количество АТ-2 (моноклональные антитела) буфером для образцов и коньюгата из расчета 1,6 мл готового раствора на 1 стрип. Во все лунки вносят по 100 мкл раствора АТ-2. Добавляют в лунки одного ряда по 100 мкл стандартов A,B,C,D,E. В остальные лунки добавляют по 100 мкл образца. После инкубации (60±5) мин.