Применение биокомпозиционного материала "Алломатрикс-имплант" в сочетании со стромальными стеогенными клетками-предшественниками при реконструктивных операциях на альвеолярных отростках челюстей

• Автор: Кузнецов, Глеб Викторович
• Шифр специальности: 14.00.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 76 с. : 37 ил.

Оглавление
Введение

Глава 1. Современные взгляды на регенерацию костной ткани

верхней челюсти при реконструктивных операциях (обзор литературы).

1.1 Количественные и качественные изменения костной ткани 11 верхней челюсти после утраты зубов.
1.2 Методы реконструкции альвеолярных отростков верхней 14 челюсти и используемые для этого материалы.

1.3 Потенциал использования стромальных остеогенных клеток 27 костного мозга.

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1 Экспериментальный раздел

2.1.1 Метод выделения и выращивания стромальных остеогенных 34 клеток-предшественников у животных.
2.1.2. Характеристика используемых материалов
2.1.3. Метод обратной трансплантации остеогенных клеток- 37 предшественников у животных.
2.1.3 Метод гистологического исследования
2.2 Клинический раздел
2.2.1 общая характеристика больных
2.2.2 Общеклинические методы исследования
2.2.3 Лучевые методы исследования
2.2.4 Метод забора костного мозга у людей
2.2.5. Метод культивирования стромальных остеогенных клеток
предшественников у людей.
2.2.6 Метод иммуноцитохимического исследования остеогенных
клеток.
2.2.7. Метод реконструктивной операции, проводимой на верхней челюсти.
2.2.8. Метод установки остеоинтегрируемых имплантатов Глава 3. Результаты применения биокомпозиционных материалов «Биоматрикс» и «Алломатрикс-имплант» совместно с аутологичными стромальными клетками-предшественниками в эксперименте.
Глава 4. Результаты клинического применения разрабатываемой методики.
4.1 Результаты изучения гомогенности выращиваемой культуры клеток у пациентов.
4.2 Результаты клинического применения биокомпозиционного материала «алломатрикс-имплант» в сочетании с аутологичными стромальными клетками-предшественниками при реконструктивных операциях на альвеолярных отростках челюстей.
Обсуждение.
Выводы.
Практические рекомендации.
Список литературы.

ВВЕДЕНИЕ.
АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.
Дефекты зубных рядов, и особенно полное отсутствие зубов, довольно часто обуславливают проблемы полноценной фиксации и функционирования протезов. Атрофия альвеолярных отростков является основным препятствием к рациональному протезированию. Средняя убыль высоты альвеолярного отростка к 6 месяцу после удаления зубов составляет в среднем 2,3 мм для нижней челюсти и 4,4 мм для верхней [53]. Особенности данной анатомической зоны не позволяют сохранять исходный размер костной ткани после экстракции зубов, следовательно, утраченный объём можно возместить только хирургическим путём, подсаживая биоматериалы, способные либо механически выполнять функции кости, либо оказывать индуцирующее влияние на процессы её регенерации.
Для создания оптимальных условий ортопедического лечения с использованием имплантатов существует отдельный класс оперативных вмешательств. Основную группу этих вмешательств составляют реконструктивные костно-пластические операции, направленные на увеличение объёма костной ткани в месте установки имплантата [72,82,117].
В настоящее время досконально изучен минеральный состав костной ткани челюстей, особенности её регенерации и ремоделирования [3]. На основании этих данных создано большое количество биокомпозиционных материалов. Применяемые костно-пластические материалы, кроме простого заполнения объёма костного дефекта, теперь выполняют сложную функцию по индукции остеогенеза, воздействию на прогениторные клетки, доставки лекарственных веществ в очаг. Для этих целей используется широкий спектр материалов: коллаген, гидроксиапатит и различные их комбинации,
консервированная алло-, ксено-, брефокость, аутокость [4,5,9,16,27,46]. Одним из наиболее часто применяемых аутологичных материалов остаётся трансплантат из гребня подвздошной кости, содержащий жизнеспособные

эмбрионов коров. Трипсинизацию в первом флаконе повторяли 3 раза, добавляя в него свежую порцию фермента в том же объёме.
Обработанные трипсином клетки центрифугировали при 1 ООО об/мин. в течение 10-12 минут при 1° = 4°С. Надосадочную жидкость удаляли. Клетки ресуспензировали в новой порции среды а-МЕМ, фильтровали через четырёхслойный капроновый фильтр и подсчитывали их количество в камере Горяева. Затем клетки в количестве 104-105 клеток на 1 см2 дна помещали во флаконы для выращивания культур. Каждый флакон содержал полную питательную смесь, состоящую из 80% среды а-МЕМ, 20% фетальной телячьей сыворотки, а также 100 ЕД пенициллина и 50 мг стрептомицина на 1 мл раствора. Культивирование клеток проводили в термостате при 37°С в атмосфере воздуха с 5% содержанием углекислого газа.
На 10-12 сутки после эксплантации клеток во флаконах формировались видимые невооружённым глазом дискретные колонии стромальных фибробластов. В дальнейшем, когда растущие клетки формировали на дне флакона плотный монослой, проводили ряд последовательных пассажей для получения достаточного числа клеток для заполнения объёма трансплантата.
Для этого из флаконов с монослоем стромальных фибробластов, отсасывали питательную среду и промывали их 20-25 мл среды 199 для удаления сыворотки. После этого промывочную среду отсасывали и во флаконы заливали 5,0-6,0 мл 0,25% раствора трипсина, которым в течение 1-3 минут обрабатывали клетки. Затем трипсин удаляли, а культуральные флаконы помещали в термостат на 15-20 минут при температуре 37°С. По истечении этого времени во флаконы добавляли 5,0-7,0 мл свежей среды а-МЕМ.
Далее, большую часть клеток отделяли от поверхности флакона лёгким покачиванием. Не открепившиеся от поверхности, клетки, смывали средой находящейся во флаконе с помощью шприца с длинной иглой, изогнутой на конце под углом 75 градусов. Полученную со всех культуральных флаконов