Биологические особенности популяции и совершенствование методов индикации Ornithobacterium rhinotracheale в объектах птицеводства

• Автор: Шурахова, Юлия Николаевна
• Шифр специальности: 16.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 124 с. : ил.

Содержание

Список сокращений

Введение

1. Обзор литературы

1.1 Роль Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) в инфекционной

патологии птиц

1.2 Распространенность возбудителя орнитобактериоза

1.3 Орнитобактериоз

1.3.1. Способы распространения. Клинические признаки и патологоанатомические изменения

1.3.2. Краткая характеристика биологических свойств ORT

1.4 Экспериментальное воспроизведение инфекции

1.5 Диагностика орнитобактериоза птиц
1.5.1 Бактериологическая диагностика орнитобактериоза
1.5.2 Серологическая диагностика орнитобактериоза
1.5.3 Диагностика орнитобактериоза с использованием иммуноферментного анализа
1.5.4 Молекулярно-генетические методы в диагностике орнитобактериоза
Заключение
2. Собственные исследования
2.1 Материалы и методы
2.1.1 Референтные культуры ORT
2.1.2 Изучение популяции О. rhinotracheale с применением методов сканирующей электронной микроскопии
2.1.3 Пробы патологического материала
2.1.4 Пробы сыворотки крови
2.1.5 Объект биологическихисследований
2.1.6 Питательные среды
2.1.7 Биохимические тесты
2.1.8 Тест на образование каталазы
2.1.9 Тест на образование оксидазы
2.1.10 Создание видоспецифичных праймеров
2.1.11 Выделение ДНК
2.1.12 Постановка ПЦР-амплификации
2.1.13 Электрофоретический анализ продуктов ПЦР
2.1.14 Постановка Р1ФА
2.2 Результаты собственных исследований
2.2.1 Оценка морфологических, культуральных и биохимических свойств ORT
2.2.2 Изучение популяции ORT при сканирующей электронной микроскопии
2.2.3 Результаты бактериологических исследований
2.2.4 Экспериментальное воспроизведение инфекции
2.2.5 Изучение распространенности орнитобактерий
2.2.6 Разработка метода обнаружения возбудителя орнитобактериоза на основе ПЦР
2.2.7 Сравнительный анализ методов выделения ДНК из патологического материала от птиц
2.2.8 Оптимизация процесса амплификации
2.2.9 Апробация чувствительности и специфичности сконструированной ПЦР тест - системы
2.2.10 Определение возможности использования метода ПЦР для
обнаружения О. rhinotracheale в патологическом материале от
птиц
3. Обсуждение результатов исследования
Выводы
Практические предложения
Список литературы
Приложение
Список сокращений
ORT (ОРТ) - Ornithobacterium rhinotracheale ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИФА (ELISA) - иммуноферментный анализ мкл - микролитр нм - нанометр
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РНК - рибонуклеиновая кислота
т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов
СПФ (SPF) — свободный от патогенных факторов

патологоанатомической картины болезней. Отмечается тенденция повышения удельного веса смешанных инфекций и увеличения частоты выявления персистирующих, латентных и атипичных форм. Ряд патогенных бактерий приобрёл способность переходить в некультивируемые формы, которые нельзя выявить традиционными микробиологическими приёмами[30,35].
Внедрение экспресс-методов, основанных на прямой индикации генетического материала возбудителя, в частности, полимеразной цепной реакции, позволяет проводить выявление и идентификацию возбудителя болезни в кратчайшие сроки с высокой достоверностью, что обеспечивает своевременное проведение противоэпизоотологических мероприятий, в том числе лечебных и профилактических, и поднимает лабораторную диагностику на новый, более высокий уровень.
В соответствии с приказом Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства РФ № 18 от 29 июня 1999 года было организовано проведение производственных испытаний метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) с целью изучения возможности использования данного метода при диагностике ряда инфекционных болезней животных. С 1999 года началось оснащение ветеринарных лабораторий оборудованием, необходимым для проведения молекулярной диагностики [20,42,53,54,56,55].
Диагностика заболеваний, характеризующиеся
преимущественным поражением респираторных органов, требует применения комплекса бактериологических, вирусологических и серологических методов. Для постановки окончательного диагноза обычно требуется 2-3 недели.
Применение современных молекулярных методов диагностики может значительно ускорить постановку диагноза,