Оценка прогноза и минимальной резидуальной болезни при В-клеточном хроническом лимфолейкозе с использованием метода многоцветной проточной цитофлуориметрии.

• Автор: Кисиличина, Дарья Григорьевна
• Шифр специальности: 14.03.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 82 с. : 31 ил.

Оглавление
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Современные представления о нормальной дифференцировке В-лимфоцитов

1.2. В-клеточный хронический лимфолейкоз

1.2.1. Эпидемиология B-XJ1J1

1.2.2. Современные представления о патогенезе В-ХЛЛ

1.1.2. Диагностика В-ХЛЛ

1.1.3. Клинические стадии В-ХЛЛ

1.1.4. Современные методы лечения В-ХЛЛ

1.3. Прогностические факторы В-ХЛЛ

1.3.1. Основные факторы прогноза течения В-ХЛЛ
1.3.2. Оценка экспрессии CD38 опухолевыми клетками В-ХЛЛ
1.3.3. Оценка экспрессии ZAP-70 опухолевыми клетками В-ХЛЛ
1.4. Минимальная резидуальная болезнь
1.4.1. Понятие минимальной резидуальной болезни (МРБ) в онкогематологии
1.4.2. Ответ на терапию как фактор риска при В-ХЛЛ
1.4.3. Современные методы оценки остаточного клона при В-ХЛЛ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Пациенты, включенные в исследование
2.2. Методы исследования
2.2.1. Общий клинический анализ крови
2.2.2. Морфологическое исследование лейкоцитов периферической крови и подсчет миелограммы
2.2.3. Иммунофенотипирование лимфоцитов методом проточной цитофлуориметрии: общие принципы
2.2.4 Иммунофенотипирование при первичной диагностике
2.2.5. Оценка экспрессии ZAP-70методом проточной цитофлуориметрии
2.2.6. Иммунофенотипирование при оценке ремиссии (анализ МРБ)
2.2.7. Оценка мутационного статуса lgVH-генов
2.2.8. Определение МРБ при В-ХЛЛ методом ПЦР с пациент-специфичными праймерами
2.2.9. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Сравнение результатов иммунофенотипического определения CD38 и ZAP-70 с данными молекулярно-генетического анализа мутационного статуса IgVH-генов
3.1.1. Оценка экспрессии ZAP-70методом проточной цитофлуориметрии

3.1.2. Определение экспрессии маркера CD38 методом проточной цитофлуориметрии
3.1.3. Оценка значимости показателей экспрессии ZAP- 70 и CD38 в качестве суррогатных маркеров мутационного статуса lgVH-генов
3.2. Оценка значения иммунофенотипических маркеров CD38 и ZAP-70 в прогнозе B-XJIJI на основании данных о времени до начала терапии
3.3. Результаты мониторирования остаточного клона при В-ХЛЛ
3.3.1. Результаты оценки ответа на терапию, полученные с помощью метода проточной цитофлуориметрии
3.3.2. Сравнение методов многоцветной проточной цитофлуориметрии и пациент-специфичной ПЦР-РВ для оценки МРБ при B-XJ1J1
3.3.3. Исследование кинетики элиминации остаточного клона
3.3.4. Значение исследования костного мозга для определения качества ремиссии при финальной оценке ответа
3.3.5 Особенности 6-цветной проточной цитофлуориметрии для оценки МРБ при В-ХЛЛ
3.3.6. Определение значения показателя МРБ на основании данных о выживаемости больных с В-ХЛЛ
3.4. Распределение иммунофенотипических маркеров CD38 и ZAP-70 в зависимости от финального МРБ-статуса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ - антиген АТ - антитело
B-XJIJ1 - В-клеточный хронический лимфолейкоз
ДС - диагностическая специфичность
ДЧ - диагностическая чувствительность
ДЭ - диагностическая эффективность
МкАТ - моноклональные антитела
МРБ - минимальная резидуальная болезнь
ОАК - общий анализ крови
ПК - периферическая кровь
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ЭДТА — этил енд нами нтетраацетат
APC - allophycocyanin
АРС-Су7 - allophycocyanin-cyanine7
BCR - В-cell Receptor
BR - Bendamustine, Rituximab
CD - cluster of differentiation
ECD - energy coupled dye
FCR - fludarabine, cyclophosphamide, rituximab
FITC - fluorescein isothyocyanate
FSC - forward site scatter
HLA - human leucocyte antigens
IgVH - immunoglobulin heavy chain variable regions
LR - leukeran, rituximab
MALT - mucosal-associated lymphoid tissue
MESF - molecules of equivalent of soluble fluorochrome
MFI - mean fluorescence intensity

использование именно многоцветной, т.е. позволяющей оценивать одновременно экспрессию 4-х и более маркеров на анализируемой клетке, проточной цитофлюориметрии.
Методы ПЦР и проточной цитофлуориметрии характеризуются различными преимуществами и недостатками, в связи с чем интерес представляет сравнительный анализ возможностей данных подходов в оценке МРБ при В-ХЛЛ. Однако, согласно литературным данным, в настоящее время опубликовано лишь нескольких работ, посвященных данной проблеме. Так, в исследованиях Böttcher с соавт. и Moreno с соавт. было проведено одновременное определение МРБ двумя методами у пациентов с В-ХЛЛ после аллогенной и аутологичной трансплантации костного мозга. Сопоставление полученных данных выявило высокую корреляцию между результатами 4-цветной цитометрии и пациент-специфичной ПЦР [37, 106]. AC Rawstron с соавтр. проводили наиболее масштабное сравнительное исследование, анализ которого свидетельствовал о хорошей сопоставимости (95% согласующихся данных) результатов ПЦР и проточной цитофлюориметрии в оценке клона В-ХЛЛ на уровне до 0,01% искомых клеток среди проанализированных. Однако авторы отмечают, что молекулярно-генетический подход характеризуется более высокой чувствительностью анализа, т.к. часть МРБ-негативных по данным проточной цитофлюориметрии образцов демонстрировали наличие остаточного клона на уровне нижней границы чувствительности метода ПЦР [125]. При этом исследователями признается существование таких преимуществ иммунофенотипического подхода, которые имеют значение для внедрения диагностики остаточного клона в широкую практику. Остаются открытыми вопросы об оптимальном подходе к оценке МРБ В-ХЛЛ при использовании ритуксимаб-содержащих режимов, а также о возможностях применения показателей мониторирования опухолевого клона для коррекции проводимой терапии.