Обоснование возможности использования производных хитозана для повышения иммуногенности гриппозных и полиомиелитных вакцин

• Автор: Переверзев, Александр Дмитриевич
• Шифр специальности: 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 133 с. : 5 ил.

Оглавление

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Гриппозные и полиомиелитные вакцины:

преимущества и недостатки

1.1. Живые и инактивированые вакцины

ГЛАВА 2. Применение хитозана и других адъювантов как способ повысить иммуногенность гриппозных и полиомиелитных вакцин

ГЛАВА З.Врожденный иммунитет. Влияние ТЫТ-адъювантов на иммунный ответ

3.1. Эффекторная и инструктивная функции врожденного иммунитета

32. Агонисты ТЕК- адъюванты новою поколения для вирусных

вакцин
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 4. Объекты и методы исследования
4.1. Вакцины
4.2. Штаммы вирусов гриппа
4.3. Вирусный материал полиомиелита
4.4. Препараты хитозана, используемые в качестве адъюванта
4.5. Куриные эмбрионы
4.6. Экспериментальные животные
4.7. Приготовление вирусного материала гриппа для опытов
4.8. Приготовление препаратов хитозана
4.9. Метод определения инфекционной активности вируса гриппа
на куриных эмбрионах
4.10. Парентеральная иммунизация мышей
4.11. Мукозальная иммунизация мышей
4.12. Выделение вирусов гриппа в куриных эмбрионах и их
идентификация
4.13. Иммуноферментный анализ (ИФА)
4.14. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) с вирусом
гриппа
4.15. Определение иммуногенности препаратов

4.16. Определение специфической активности антигенов в реакции
торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА)
4.17. Получение дендритных клеток (ДК) из костномозговых предшественников
4.18. Оценка фенотипа ДК мышей
4.19. Получение ДК из мононуклеарных лейкоцитов периферической крови (МЛПК) человека
4.19.1. Получение моноцитов из МЛПК
4.19.2. Получение ДК из моноцитов
4.20. Оценка экспрессии ТТЛя
4.21. Получение суспензии мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) мышей
4.22. Характеристика поверхностных антигенов мононуклеарных
лейкоцитов селезенки мышей
4.23. Определение уровня цитокинов в культуре ДК костного мозга
С57ЛЗЬ6 мышей
4.24. Определение уровня цитокинов в сыворотках/плазме крови и
супернатантах спленоцитов мышей
4.25. Определение цитотоксической активности МЛ селезенок мышей
4.26. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 5. Факторы, влияющие на адъювантные свойства произвол- , м ных хитозана при парентеральном введении инактивирован- ■ А, 1 К";?/;1 ных гриппозных вацин
ГЛАВА 6. Сравнительное изучение адъювантных свойств препаратов хитозана при парентеральной иммунизации инактивированной гриппозной вакциной
ГЛАВА 7. Повышение иммуногенности холодоадаптированного
(ХА) штамма-донора аттенуации для живых гриппозных вакцин
ГЛАВА 8. Сравнительное изучение адъювантных свойств различных форм хитозана при мукозальной вакцинации живой и инактивированной гриппозными вакцинами
ГЛАВА 9. Изучение иммунного ответа мышей, иммунизированных интраназально живой гриппозной холодоадаптированой (ХА) вакциной в комбинации с производными хитозана в качестве адъювантов
9.1. Иммунофенотипические характеристики мононуклеарных лейкоцитов мышей интраназально иммунизированных ХА живой гриппозной вакциной в комбинации с производными хитозана в качестве адъювантов

9.2. Влияние производных хитозана в составе ХА живой гриппозной вакцины на содержание TLR-2, TLR-4 и TLR-9-экспресси-рующих клеток
9.3. Влияние производных хитозана в составе ХА живой гриппозной вакцины на уровень цитокинов
ГЛАВА 10. Особенности иммуногенного ответа при иммунизации мышей полимиелитной вакциной в комбинации с препаратами хитозана в качестве адъювантов
10.1. Влияние препаратов хитозана на иммунный ответ при паренте-
ральном введении мышам этих препаратов в комбинации с инактивированными штаммами Сэбина полиовируса типов 1, 2,
10.2. Изучение иммунофенотипа мононуклеарных лейкоцитов мышей, иммунизированных парентерально инактивированным штаммом Сэбина 1 типа и инактивированной трехвалентной полиовакци-
ной Имовакс в комбинации с препаратами хитозана
10.3. Активация TLRs в процессе парентеральной иммунизации мышей полиовирусом и полиомиелитной вакциной в комбинации
с препаратами хитозана
10.4. Цитотоксическая активность МЛ селезенок мышей
10.5. Продукция цитокинов у мышей при парентеральной иммуниза-
ции мышей полиовирусом и полиомиелитной вакциной в комбинации с препаратами хитозана
ГЛАВА'11. Воздействие производных хитозана на дифференцировку v,‘ ,, и функциональную активность дендритных клеток мышей
11.1. Влияние производных хитозана на экспрессию клеточных
маркеров и TLRs в культуре ДК мышей
11.2. Влияние производных хитозана на уровень цитокинов в культуре
ДК мышей C57/BL
ГЛАВА 12. Экспрессия эндоплазматических TLRs в дендритных клетках человека под воздействием инактивированных и живых вирусных вакцин в сочетании с хитозаном
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Роль TLR в определении последствий гриппозной инфекции только начинает изучаться. Исследование потери чувствительности макрофагов в верхних дыхательных путях к бактериальным TLR агонистам [94] может пролить свет на дисфункцию TLR и их роль как медиаторов повышенной чувствительности к бактериальной пневмонии после гриппозных инфекций. Авторы продемонстрировали, что через 2-6 недель после гриппозной инфекции активность нейтрофилов в ответ на воздействие агонистов TLR2, TLR4 и TLR5 была подавлена, что было связано со снижением продукции TLR-индуцированных цитокинов и коррелировало с высоким уровнем размножения грамположительных и грамотрицательных бактерий в легких. Механизм ослабления миграции нейтрофилов был также следствием снижения сигналов хемотаксиса. Также установлено, что ответ периферических моно-нуклеарных лейкоцитов на воздействие TLR-лигандов у лиц, перенесших гриппозную инфекцию, был значительно ниже по сравнению с контролем. У пожилых людей отмечается высокий уровень гриппозных осложнений (включая бактериальные инфекции), который сопровождается сниженным титром антител после вакцинации гриппозными вакцинами. Снижение продукции TNF-a, IL-6 и IL-12p40 наблюдалось при стимуляции TLR1, TLR2, TLR3, TLR5, TLR6, TLR7, TLR8 у пожилых людей по сравнению с молодыми. Это различие наблюдается у 80% пожилых лю-дей, несмотря на отсутствие сопутствующих заболеваний. Снижение продукции TLR-индуцируемых цитокинов было ассоциировано с отсутствием защитного эффекта специфических антител к тривалентной гриппозной вакцине.
Недавно было показано, что отдельные штаммы вирусов гриппа сероподти-пов Н1 и Н5 могут вызывать серьезные повреждения различных отделов респираторного тракта. Эти повреждения ассоциированы с сильной экспрессией цитокинов и хемокинов [174], в частности, с повышенной продукцией TNF-a, INF-y, интерлейкинов 8, 10, 6, белка МСР-1, JP-10. На модели обезьян было обнаружено, что вирус гриппа 1918г. значительно увеличивал уровень IL-6, IL-8, МСР-1 и RANTES в сыворотке крови животных. Можно предположить, что высокая вирулентность вируса гриппа каким-то образом связана с извращенной индукцией врожденного иммунитета [179]. Был обнаружен важный факт, что главными продуцентами избыточного количества цитокинов во время летальных гриппозных инфекций, вызванных вирусами FI5N1 и H1N1, являются эндотелиальные клетки, выстилающие