Механизмы и роль атерогенной модификации липопротеидов в атерогенезе

• Автор: Мельниченко, Александра Александровна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 252 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ

Цель настоящей работы

Основные задачи исследования:

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость

Основные положения, выносимые на защиту

Реализация результатов работы

Структура и объем диссертации

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль множественно модфицированных ЛНП в атерогенезе

1.2 Циркулирующие множественно модифицированные липопротеиды
низкой плотности
1.3 Атерогенность липопротеидов низкой плотности
1.4 Усиление способности вызывать накопление внутриклеточных
липидов модифицированных липопротеидов после их ассоциации
1.5 Взаимодействие липопротеидов низкой плотности с компонентами
внеклеточного матрикса
1.6 Липопротеидсодержащие циркулирующие иммунные комплексы
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Аутопсийный материал
2.2 Гистохимическое выявление липидов
2.3 Исследование посредством трансмиссионной электронной
микроскопии (ТОМ)
2.4 Электронно-микроскопический гистохимический анализ
2.5 Хроматографическое определение липидов на криостатном срезе
2.6 Первичная культура субэндотелиальных клеток аорты человека
2.7 Культура моноцитов-макрофагов крови человека
2.8 Получение сыворотки крови
2.9 Оценка антиатерогенного эффекта в модели in vitro

2.10’ Определение пролиферативной активности
2.11 Определение синтеза клеточного белка
2.12 Определение синтеза коллагена
2.13 Изучение внутриклеточного метаболизма эфиров холестерина
2.14 Изучение внутриклеточного синтеза липидов
2.15 Выделение и фракционирование липопротеидов низкой плотности.
2.15.1 Доноры
2.15.2 Получение плазмы и сыворотки крови
2.15.3 Выделение суммарной фракции липопротеидов низкой плотности из плазмы крови
2.15.4 Определение концентрации белка в препаратах ЛНП
2.15.5 Получение фракций нативных и циркулирующих множественно модифицированных липопротеидов низкой плотности
2.16 Анализ ЛНП
2.16.1 Экстракция липидов из ЛНП
2.16.2 Анализ липидов ЛНП при помощи тонкослойной
хроматографии
2.16.3 Электрофорез в полиакриламидном геле
2.16.4 Электрофорез в агарозном геле
2.16.5 Определение тиобарбитуровая кислота (ТБК)-реактивных
продуктов
2.16.6 Определение содержания сиаловой кислоты в ЛНП
2.17 Определение степени ассоциации ЛНП и размера ассоциатов
2.17.1 Определение относительного размера ЛНП (метод флуктуации светопропускания)
2.17.2 Определение размера ассоциатов ЛНП
2.1 8 Основные характеристики использованных в работе полоксамеров.

2.19 Ультразвуковое сканирование сосудов
2.20 Статистическая обработка данных
3 РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Морфологическая визуализация и анализ распределения липидов в атеросклеротических поражениях человека
3.2 Оптимизация клеточной модели для оценки атерогенности ЛНП
3.3 Ассоциация ЛНП - ключевой фактор их атерогенности
3.3.1 Самоассоциация ЛНП
3.3.2 Разработка метода определения степени ассоциации (сравнение методов светопропускания и светорассеяния)
3.3.3 Ассоциация с внеклеточным матриксом
3.3.4 Образование циркулирующих иммунных комплексов
3.4 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамерами
3.4.1 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамерами Р85 и Ь64
3.4.2 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамером Ь
3.4.3 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамерами Ь61 и Ь81
3.4.4 Влияние полоксамеров Ь81 и Ь64 на внутриклеточное
накопление липидов
3.5 Разработка методов диагностики факторов атерогенности
3.5.1 Разработка и модификация метода определения уровня цммЛНП
в сыворотке
3.5.2 Сравнение диагностической значимости цммЛНП и ЦИК-ЛНП
3.5.3 Оценка диагностической и прогностической значимости ЦИК
3.5.4 Разработка аналитической тест-системы для оценки
атерогенных свойств сыворотки
соодержащих сегментов апобелка (Camejo et al., 2000) и делает струкктуру ЛНП менее стаабильной (Camejo et al., 2000).
Липопротеиды, модифицированные фосфолипазой А2 гораздо легче поддаются обработке другими агентами, такие ЛНП захватыватся макрофагами, вызывая липоидоз. Было показано, что продукты взаимодейсвия ЛНП с фосфолипазами также вызывают внутриклеточное накопление липидов (Hurt-Camejo et al., 2001).
Обработка липопротеидов фосфолипазой С приводит к тому, что частица ЛНП становится более липофильой, т.к. фосфохолин уходит из частицы, а гидрофобный диацилглицерин располагается как в ядре, так и на поверхности липопротеида. Взаимодействие липопротеидов с
фосфолипазой С приводит к агрегации и дальнуйшему слиянию частиц ЛНП (Bancells С, 2010; Zhang WY, 2000 ). По всей видимости, это является следствием образованиея липофильных доменов в поверхностном монослое ЛНП. Также было показано, что ЛНП модифицированные фосфолипазой С, вызывают внутриклеточное накопление этерифицированного холестерина в макрофагах (Bancells С, 2010; Heinecke JW, 1991). Показано, что ассоциаты модифицированных фосолипазой С ЛНП сначала попадают в фагосомы, после чего переходят во вторичные лизосомы, а образующийся в результате расщепления холестерин подвергается повторной этерификации и образует липидные капли.
Окисление ЛНП приводит к ассоциации последних. Например, окисление липопротеидов ионами меди приводит к нарушению целостности ЛНП, что вызывает слипание и дальнейшее слияние частиц липопротеидов (Daub К, 2010).