Механизмы реализации регуляторного влияния тнтерлейкина -2 на апоптоз лимфоцитов крови

• Автор: Сазонова, Елена Викторовна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Кемерово
• Количество страниц: 129 с. : 9 ил.

Оглавление

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Интерлейкин-2: строение, функции, механизмы влияния на жизнедеятельность клетки-мишени

1.2. Молекулярные аспекты регуляции апоптоза,

опосредованного 1Б

1.3. Механизмы дизрегуляции 1Е-2 - опосредованного апоптоза

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материал исследования

2.1.1 Экспериментальный блок исследования

2.1.2 Клинический блок исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение лимфоцитов крови
2.2.2. Культивирование лимфоцитов крови
2.2.3. Оценка продукции интерлейкина-2 лимфоцитами
2.2.4. Оценка количества лимфоцитов крови, несущих рецептор к 1Ь
2.2.5. Оценка реализации апоптоза лимфоцитов крови
2.2.6. Оценка количества клеток со сниженным уровнем потенциала митохондриальной мембраны
2.2.7. Оценка содержания активных форм кислорода в лимфоцитах крови
2.2.8. Оценка уровня факторов транскрипции и белков-регуляторов апоптоза в лимфоцитах крови
2.2.9. Статистический анализ результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Исследование 1Е-2-опосредованного апоптоза лимфоцитов
3.1.1. Особенности реализации программированной гибели лимфоцитов крови при действии рекомбинантного 1Ь
3.1.2. Состояние элементов системы 1Т-2-1Е-211 и особенности реализации апоптотической гибели лимфоцитов при клещевом энцефалите
3.2. Молекулярные механизмы 1Г-2-опосредовашгого апоптоза лимфоцитов70
3.2.1. Исследование количества лимфоцитов со сниженным трансмембранным потенциалом митохондрий и внутриклеточного содержания активных форм кислорода в условиях культивирования с рекомбинантным 113-2 и при клещевом энцефалите
3.2.2. Оценка уровня белков семейства Вс1-2 в лимфоцитах

крови в условиях культивирования с рекомбинантным 1Ь-2 и при клещевом энцефалите
3.2.3. Исследование уровня транскрипционных факторов ИИсВ, Р53 и ингибитора циклинзависимых киназ Р21 в лимфоцитах в условиях культивирования с рекомбинантным 1Ь-2 и при клещевом энцефалите
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Выводы
Список литературы
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ГК - глюкокортикоид
АР 1 - activator protein 1, активирующий белок
Bad - Bcl-2 agonist of cell death, Bcl-2-агониет клеточной смерти
Вах - Bcl-2-associated X protein, Вс1-2-ассоциированный белок X
Bcl-2 - В-cell lymphoma/leukemia protein 2, белок 2 В-клеточной
лимфомы/лейкемии
Bcl-Xi, - Bcl-2 related protein (long isoform), Bcl-2-связанный белок (длинная изоформа)
CD - cluster of differentiation, ластер дифферендировки
DAP - death-associated protein, белок, ассоциированный с гибелью
GAFDG - глицеральдегидфосфатдегидрогеназа
GM-CSF - granulocyte macrophage colony-stimulating factor, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор IkB - ингибитор ядерного фактора кВ IL - interleukin, интерлейкин
IL-2R — interleukin-2 receptor, рецептор к интерлейкину
rIL-2 - recombinant interleukin-2, рекомбинантный интерлейкин
INFy - interferon у, интерферон у
IAPs - Inhibitors of apoptosis, ингибиторы апоптоза
JNK — c-Jun N-terminal kinase, c-Jun N-терминальная киназа
МАРК - mitogen-activated protein kinases, митоген-активируемые
протеинкиназы
MnSOD - магниевая супероксиддисмутаза NFkB - nuclear factor кВ, ядерный фактор кВ NK — natural killer, естественные киллер
P13K/AKT -Serine/threonine protein kinase, серин-треониновая киназа P38 МАРК - митоген-активируемая протеинкиназмапкиназа Р38 РКВ - protein kinase В, протеинкиназа В PI - propidium iodide, пропидиум йодид

этих нарушений сопряжена с поражением иммунокомпетентных клеток бактериальными и вирусными агентами, а также изменением-* продукции цитокинов или структуры их рецепторов. Показано, что у мышей с отсутствием IL-2Rß наблюдаются спонтанная активация Т-лимфоцитов и, как следствие, интенсивная диффсренцировка В-лимфоцитов в плазматические клетки с повышенным образованием аутоантител и развитием гемолитической анемии. У этих животных был значительно снижен ответ на вирусную инфекцию, что связано с дефектом как клеточного, так и гуморального звеньев противовирусного иммунитета [Chen Y. et al., 2005].
Экспериментальное удаление гена IL-2Ry приводило к тяжелому иммунодефициту, затрагивающему процессы созревания и функционирования лимфоцитов. У человека мутации в гене IL-2Ry, ведущие к делеции аминокислотных остатков в положениях 62 и 81, связаны с развитием патологического состояния, известного как сцепленный с Х-хромосомой синдром комбинированной иммунной недостаточности. Это заболевание характеризуется отсутствием или значительным снижением содержания Т-лимфоцитов и резко угнетенными показателями клеточного и гуморального иммунитета [Lindemann M.J., 2002]. Представляет интерес тот факт, что в данном случае в системе цитокиновой регуляции иммунитета не оказалось компенсаторных механизмов, обеспечивающих сохранение функции при дефиците одного из компонентов, как это происходит в отношении многих цитокинов, обеспечивающих функциональную взаимозаменяемость друг друга. Это обусловлено тем, что IL-2Ry фокусирует на себе действие нескольких важнейших цитокинов и её отсутствие не может быть заменено другими рецепторами [Симбирцев A.C., 1998].
Развитие иммунодефицита на фоне дефектной структуры а- и ß-цепей IL-2R связано с невозможностью передачи сигнала от данного цитокина на

киназы JAK1 и JAK3, в норме ассоциированные с IL-2Rß и IL-2Ry и

являющиеся ключевыми медиаторами сигнальной трансдукции антиапоптотического сигнала, опосредованного IL-2 [Boytim M.L. et al., 2000;