Эффективность защитного действия L-теанина и гипоксической гипоксии при ишемии головного мозга крыс

• Автор: Зухурова, Мавджуда Ашуровна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 97 с. : 25 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Актуальность проблемы
1.2. Патогенез ишемического повреждения головного мозга
1.2.1. Энергетический дефицит, значение свободных радикалов 11 и тканевого pH при ишемии головного мозга.
1.2.2. Значение оксида азота в патогенезе повреждения 15 головного мозга.
1.2.3. Значение эксайтотоксичности в повреждении головного 18 мозга при ишемии.
1.2. Методы защиты головного мозга от ишемического и
реперфузионного повреждения.
1.2.1. Гипоксия как прекондиционирующий фактор.
1.2.2. Е-теанин - нейропротективное действие и механизмы 26 влияния на ЦНС.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1. Моделирование ишемии головного мозга.
3.2. Определение размера повреждения головного мозга.
2.3. Оценка неврологических нарушений при ишемии- 36 реперфузии головного мозга крысы.
2.3.1. Тестирование крыс по шкале Гарсия.
2.3.2. Модифицированный адгезивный тест
2.3.3. Тест на симметричность движений языка
2.4. Исследование поведенческих реакций животного.
2.5. Применение прекондиционирующих факторов
2.5.1. Введение Ь-теанина.
2.5.2. Моделирование гипобарической гипоксии
2.6. Гистологическое исследование.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Гистологическое исследование ткани мозга крыс после 30- 49 минутной окклюзии средней мозговой артерии.
3.2. Влияние различных концентраций и разных сроков 52 введения Е-теанин а на степень ишемического и

реперфузионного повреждения головного мозга.
3.2.1. Влияние различных концентраций Ь-теанина на степень ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга после окклюзии СМА.
3.2.2. Влияние введение Ь-теанина на степень ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга на разных
сроках после окклюзии СМА.
3.3. Роль механизмов эксайтотоксичности в эффективности 65 нейропротективного действия Ь-теанина.
3.4. Влияние сочетанной нейропротекции гипоксией и Ь- 73 теанином на степень ишемического и реперфузионного повреждения головного мозга.
3.5. Эффективность Ь-теанина при длительном (до 4 недель) 78 наблюдении.
3.5.2. Исследование поведенческих реакций на сроке до 4-х
недель после окклюзии СМА.
Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы
Список основных обозначений и сокращений
СМА - средняя мозговая артерия ОСМА - окклюзия средней мозговой артерии ТТХ - 1,2,3-трифенилтетразолия хлорид NMDA - N-метил-О-аспартат
АМРА - а-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовая кислота NGFI - индуцируемый фактором роста нервов NOS — синтаза оксида азота

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность исследования
Сердечно-сосудистые заболевания занимают ведущее место в структуре общей заболеваемости и смертности в России и во всем мире (Levi et al, 2002). При этом цереброваскулярная патология является ведущей причиной инвалидизации населения (Гусев Е.И., 2003). В 2005 г. в мире инсульт был причиной 5,7 млн смертельных исходов, прогнозируется рост смертности от инсульта до 6,7 млн к 2015 г, если не будут предприняты активные глобальные меры по борьбе с этой «эпидемией» (Culebras F., 2007), Главным средством борьбы с развивающимся поражением головного мозга при ишемическом инсульте служит реперфузия - восстановление кровотока в ишемизированном участке. Однако повреждение ткани головного мозга не ограничивается продолжительностью ишемии. Ишемия мозга запускает целый каскад реакций, связанных с активацией глутаматной и аспартатной эксайтотоксичности, свободнорадикальным повреждением и другими механизмами (Choi D.W., Rothan S.M., 1990; Won S.J. et al., 2002; Liu Z. el al., 2010). Показано, что при окклюзии средней мозговой артерии у крыс уже через 15 минут в области гипоталамуса и гиппокампа резко повышается уровень глутамата, достигая пика через 1 час после начала ишемии (Не М. et al., 2003). Поэтому поиск механизмов защиты головного мозга от ишемического и реперфузионного повреждения является важнейшей задачей. Существует ряд методик, позволяющих снизить ишемическое-реперфузионное повреждение. Одной из наиболее эффективных является ишемическое прекондиционирование головного мозга (Kitagawa K. et al,, 1990), которое существенно снижает размер повреждения и выраженность функциональных нарушений. Важным стимулом, имеющим сходные с ишемией механизмы повреждения клеток, является гипоксия, в связи с чем. кратковременные гипоксические воздействия на ткани, в том числе и на головной мозг могут быть отдельным направлением прекондиционирования (Семенов Д. Г. и соавт., 2004; Sharp F. et al., 2004).
Рис. 2.1. Этапы операции по моделированию ишемии головного мозга.
Через 30 минут нить извлекалась и для предупреждения кровотечения перевязывалась проксимальная лигатура на наружной сонной артерии, рана ушивалась.
2.2. Определение размера повреждения головного мозга
Оценка ишемического повреждения головного мозга производилась через 48 часов после восстановления кровотока. Для определения размера инфаркта головного мозга в экспериментах in vivo использовали общепринятый метод, позволяющий на макроскопическом уровне отграничить необратимо поврежденную (некротизированную) от ткани мозга, сохранившей жизнеспособность, и основанный на окрашивании срезов головного мозга 1,2,3-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ). Срезы мозга помещали в 2% раствор ТТХ (МР Biomedicals, США), окрашивающий жизнеспособную ткань с сохраненной активностью НАД-зависимых ферментов в ярко-красный (кирпичный) цвет. Инкубацию срезов осуществляли в течение 15 минут при температуре 37°С и pH 7,4. После инкубации срезов с ТТХ на срезах мозга определялись участки кирпичного цвета и участки нативного цвета, после чего обе поверхности всех срезов фотографировали цифровой камерой Olympus С-4000, сопряженной с помощью микрофотографического устройства с микроскопом МБС-10 (ЛОМО, Санкт-Петербург). Изображения таких срезов затем обрабатывали