Механизмы дизрегуляции рецептор-опосредованной активации Т-лимфоцитов крови при туберкулузе легких

• Автор: Кошкина, Анна Алексеевна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 127 с. : 6 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общая характеристика туберкулеза легких

1.2 Вторичная иммунологическая недостаточность и туберкулез

1.3 Алгоритм иммунного ответа против Mycobacterium tuberculosis

1.4 Роль механизмов сигнальной трансдукции в реализации иммунного ответа на Mycobacterium tuberculosis

1.4.1 «Иммунологический синапс» и его роль в иммунном ответе

1.4.2 Роль транскрипционных факторов в иммунном ответе

1.4.2.1 Ядерный фактор активированных Т-клеток (NFAT)

1.4.2.2 Активирующий протеин-1 (АР-1)
1.4.2.3 Транскрипционный фактор NF-кВ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Характеристика обследованных лиц основной и контрольной групп
2.2 Материал исследования
2.3 Методы исследования
2.3.1 Определение общего количества и отдельных морфологических форм лейкоцитов в периферической крови
2.3.2 Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови
2.3.3 Выделение лимфоцитов из взвеси мононуклеарных лейкоцитов
2.3.4 Подсчет количества лимфоцитов и определение жизнеспособности клеток в полученной суспензии
2.3.5 Специфическая индукция лимфоцитов
2.3.6 Определение поверхностных молекул CD3, CD28 и внутриклеточного IL-2 в лимфоцитах периферической крови методом проточной цито-флуориметрии
2.3.7 Определение поверхностной молекулы CTLA-4 на СБЗ-лимфоцитах методом проточной цитофлуориметрии

' Определение внутриклеточных транскрипционных факторов NF-kB,

AP-1, NFAT1 и NFAT2 в лимфоцитах периферической крови методом проточной цитофлуориметрии
2.3.9 Исследование базальной и СОЗ/С028-индуцированной секреции IL-
2 лимфоцитами крови методом иммуноферментного анализа
2.4 Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Количественные показатели крови у больных туберкулезом легких
3.2 Общее количество и субпопуляционный состав Т-лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких
3.3 СОЗ/'СТ)28-индуцировапная экспрессия CTLA-4 на Т-лимфоцитах
крови in vitro у больных туберкулезом легких
3.4 СОЗ/С1)28-индуцироваиная активность транскрипционных факторов
NF-кВ, АР-1, NFAT в Т-лимфоцитах крови у больных туберкулезом легких
3.5 Уровень СОЗ/СС28-индуцированной секреции IL-2 in vitro в культу-
ре лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВИН - вторичная иммунологическая недостаточность
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ДМСО - диметилсульфоксид
ДТЛ - диссеминированный туберкулез легких
ИК - иммунный комплекс
ИТЛ - инфильтративный туберкулез легких
ИФА - иммуноферментный анализ
ЛУТЛ - лекарственно-устойчивый туберкулез легких
ЛЧТЛ - лекарственно-чувствительный туберкулез легких
МКАТ - моноклональные антитела
МВТ - микобактерии туберкулеза
ПТП - противотуберкулезный препарат
ТЛ - туберкулез легких
ТФ транскрипционный фактор
ЦТЛ - цитотоксический Т-лимфоцит
ЭТС - эмбриональная телячья сыворотка
АР-1 - Activator protein 1 - активирующий протеин
АРС - Antigen-presentation Cell - антигенпрезентирующая клетка
CD - Claster of Differentiation - кластер дифференцировки
CTLA-4 - Cytotoxic T-lymphocyte Antigen 4 - цитотоксический Т-лимфоцитарный антиген
DC - Dendritic Cell - дендритная клетка
IFN - Interferon - интерферон
Ig - Immunoglobulin - иммуноглобулин
IKK - IkB kinase complex - ингибиторующий киназный комплекс IL - Interleukin - интерлейкин
IRAK - IL-lR-ассоциированная серин/треониновая протеинкиназа IRF - Interferon Regulatory Factor - регуляторный фактор интерферона IS - Immunological Synapse - иммунологический синапс JAK - Janus Kinase - тирозинкиназа семейства Janus LPS - Lipopolysaccharide - липополисахарид

ждение» к активации Т-хелперов-предшественников через костимуляционные молекулы, а также структурные компоненты, обеспечивающие прочность физической связи в процессе кооперации клеток. При этом надежность физического контакта не менее важна, учитывая, что процесс передачи активационного сигнала является динамичным и требует наличия определенного «порогового» времени, по истечении которого наивные Т-клетки переходят в стадию дифференцировки и пролиферации. Нарушения в структуре рецепторных молекул, изменения уровня экспрессии или функциональная неполноценность хотя бы одного из компонентов IS могут существенно влиять на качество стимулирующего импульса, а следовательно, на ответную реакцию Т-лимфоцитов и эффективность формирующегося иммунного ответа в дальнейшем.
1.4.2 Роль транскрипционных факторов в иммунном ответе
1.4.2.1 Ядерный фактор активированных Т-клеток (NFAT)
Ядерный фактор активированных Т-клеток NFAT (nuclear factor of activated T cells) играет важную роль в реализации иммунных реакций организма. На сегодняшний день идентифицировано пять представителей NFAT-семейства: NFAT1 (NFATp, NFATc2), NFAT2 (NFATc, NFATcl), NFAT3 (NFATc4), NFAT4 (NFATx, NFATc3) [McCaffrey P.G., Luo C., 1993; Masuda, E.S. et al., 1995; Ho S.N., et al., 1995; Macian F., 2005] и NFAT5 [Loez-Rodrigez C., 1999; Абатуров A.E., 2008]. Три из них (NFAT1, NFAT2 и NFAT4) экспрессируются клетками иммунной системы: тимоцитами [Masuda, E.S. et al., 1995; Amasaki Y. et al., 1998; Soto-Nieves N., 2009], T- и В-лимфоцитами [McCaffrey P.O. et al., 1993; Nortrop J.P. et al., 1994; Loh C. et al., 1996; Macian F., 2005], NK-клетками, а также рядом потомков миелоидного ростка - макрофагами и тучными клетками [Loh С. et al., 1996; Macian F., 2005]. При этом NFAT4 преимущественно выявляется в тимоцитах, a NFAT1 и NFAT2 - в зрелых лимфоцитах и NK-клетках. Позднее была обнаружена ядерная форма NFAT -NFATn [Абатуров А.Е., 2008].
Белки семейства NFAT, активируя транскрипцию большинства цитокиновых и других индуцибельных генов в ходе иммунного ответа, контролируют процессы пролиферации, дифференцировки и реализации эффекторных функций, а также запрограммированной гибели иммунокомпетентных клеток. Факторы NFAT-семейства являются эффективными активаторами транскрипции генов цитокинов