Роль бактерицидных механизмов фагоцитоза Francisella tularensis разных подвидов в патогенезе туляремии (экспериментальное исследование)

• Автор: Татарников, Станислав Александрович
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 133 с. : 7 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 ОСНОВНЫЕ АСПЕКТЫ МИКРОБИОЛОГИИ И ПАТОГЕНЕЗА ТУЛЯРЕМИИ

1.1 Таксономия и биологические свойства Francisella tularensis

1.2 Механизмы вирулентности F. tularensis и роль клеточных факторов в патогенезе туляремии

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Экспериментальные животные

2.2 Штаммы бактерий
2.3 Питательные среды
2.4 Молекулярно-биологический метод выявления «островов патогенности»
2.5 Получение макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов
2.5.1 Получение резидентных перитонеальных макрофагов
2.5.2 Получение полиморфноядерных лейкоцитов
2.6 Определение фагоцитарной активности макрофагов
2.7 Определение метаболитов кислорода в фагоцитах
2.8 Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
2.9 Определение активности НАДФ-Н-оксидазы
2.10 Определение активности миелопероксидазы
2.11 Определение содержания неферментных катионных белков
2.12 Определение активности NO-синтазы
2.13 Определение цитокинпродуцирующей активности
2.14 Статистические методы
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА 3 ИССЛЕДОВАНИЕ IN VITRO ФАГОЦИТАРНОЙ СПОСОБНОСТИ МОНО- И ПОЛИНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ МОРСКОЙ СВИНКИ ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С FRANCISELLA TULARENSIS РАЗНЫХ ПОДВИДОВ
3.1 Влияние туляремийного микроба разных подвидов на фагоцитар-ную активность и завершенность фагоцитоза
3.2 Бактерицидные системы фагоцитов при взаимодействии с туля-ремийным микробом разных подвидов
3.2.1 Кислородзависимыйметаболизм фагоцитов
3.2.2 Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и НАДФ-Н-оксидазы
3.2.3 Синтез монооксида азота фагоцитами

3.2.4 Активность кислороднезависимых бактерицидных систем фа- ^
гоцитов
ГЛАВА 4 БАКТЕРИЦИДНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ФАГОЦИТОЗА FRANCISELLA TULARENSIS В ДИНАМИКЕ ИНФЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА, ВЫЗВАННОГО ТУЛЯРЕМИЙНЫМ МИКРОБОМ РАЗНЫХ ПОДВИДОВ
4.1 Фагоцитарная активность иммунокомпетентных клеток органов экспериментальных животных, инфицированных туляремийным микро- „ бом разных подвидов
4.2 Функциональное состояние иммунокомпетентных клеток экспериментальных животных, инфицированных туляремийным микробом ^ разных подвидов
4.2.1 Кислородзависгшый метаболизм фагоцитов морской свинки
4.2.2 Активность НАДФН-оксидазы
4.2.3 Активность миелопероксидазы
4.2.4 Продукция монооксида азота фагоцитирующими клетками
4.2.5 Цитокиновьш статус фагоцитирующих клеток
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АФК - активные формы кислорода
АФА - активные формы азота
Г6ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа
ДМСО - диметилсульфоксид
ЗФР - забуференный 0,9 % раствор хлористого натрия pH 7,
ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза
ИЕСК - иммунокомпетентные клетки
ИЛ - интерлейкины (1, 6 и т.д.)
ИФА - иммуноферментный анализ
ИФН-у - интерферон гамма
КЗМ - кислородзависимый метаболизм
кДа - килодальтон
КОЕ - колониеобразующая единица
ЛД5о (ЬОзд) - доза испытуемого агента, вызывающая гибель 50 % взятых в опыт животных
лпс - липополисахарид
мкМ - микромоль
мМ - миллимоль
м.м. - молекулярная масса
МПО - миелопероксидаза
МФ - макрофаг
НАДФ - никотинамидадениндинуклеотид фосфат
НАДФ-Н - никотинамидадениндинуклеотид фосфат восстановленный
НСТ- тест - тест с нитросиним тетразолием
НКБ - неферментные катионные белки
НЧС - нормальная человеческая сыворотка
ПАФ - процент активных фагоцитов
тж - перитонеальные макрофаги
п.н. - пар нуклеотидов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЯЛ - полиморфноядерные лейкоциты
СМФ - система мононуклеарных фагоцитов
сод - супероксиддисмутаза
ФИ - фагоцитарный индекс
ФНО-а - фактор некроза опухолей альфа
ФП - формазанположительные клетки
ЦПА - цитохимический показатель активности
АсрА - кислая фосфатаза
АБС - ассоциированный с апоптозом протеин
Вс - доза антигена, вызывающая гибель 100 % животных
БРІ - остров патогенности Г. Ы1агет

Несмотря на расшифровку в последние годы генома туляремийного микроба и обнаружение стремительно возрастающего количества генов, связанных с патогенезом туляремии, практически мало известно о роли микробицидных механизмов фагоцитоза F. tularensis, особенно в плане сравнительной характеристики патогена разных подвидов.
Накопленные к настоящему времени материалы свидетельствуют о том, что при инфицировании клеток хозяина F. tularensis активирует очаг воспаления. Как известно, вирулентность этого патогена зависит от его способности проникать в цитозоль фагоцитов, активировать каспазу-1, приводящую к высвобождению цитокинов и гибели клетки хозяина посредством пироптоза [125, 160].
Основой невосприимчивости макроорганизма к инфекционным агентам являются реакции неспецифической резистентности [9, 196]. Фагоциты осуществляют антимикробную защиту, и от их функционального потенциала во многом зависят течение и исход заболевания. Нарушения функциональной активности в фагоцитарном звене иммунной системы не всегда могут клинически выражаться [50]. Тем не менее, при определенных обстоятельствах возможен кумулятивный эффект, ведущий к проявлению дисбаланса (фенотипический первичный дефект) неспецифических клеточных факторов защиты.
При описании патогенеза туляремии было отмечено, что ускользание от фагосомы необходимо для размножения бактерий, но оно также имеет решающее значение для механизмов защиты макроорганизма, которые включают участие цитозольных систем врожденного иммунного распозна-вания.
Клетки природных штаммов F. tularensis при попадании в цитозоль (но не мутанты, остающиеся локализованными в вакуоле) индуцируют в макрофагах хозяина защитный ответ, который зависим от каспазы-1 и протеина ASC. Исходящий от них сигнал приводит к гибели клеток макроорганизма и высвобождению ИЛ-1 и ИЛ-18. У дефицитных по каспазе-1 и