Молекулярно-генетические механизмы формирования эозинофилии при туберкулезе легких

• Автор: Михеева, Ксения Олеговна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 129 с. : 7 ил.

Содержание

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Эпидемиология туберкулеза легких

1.2. Общие сведения об этиопатогенезе туберкулезной инфекции

1.3. Иммунопатогенез туберкулезной инфекции

1.4. Современные представления о строении и функциональных особенностях эозинофилов в норме и при патологии

1.5. Механизмы развития эозинофилии крови при патологии

1.6. Структурные основы функционального полиморфизма генов цитокинов

1.7. Связь аллельного полиморфизма промоторных регионов генов
цитокинов с формированием эозинофилии при заболеваниях
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Общая характеристика клинического материала
2.2. Материал исследования
2.3. Методы исследования
2.3.1. Определение общего количества лейкоцитов в периферической крови
2.3.2. Подсчет лейкоцитарной формулы
2.3.3. Выделение и культивирование эозинофильных гранулоцитов периферической крови
2.3.4. Определение содержания цитокинов в крови и супернатантах культуральных суспензий эозинофильных гранулоцитов
2.3.5. Определение мембраносвязанных форм цитокиновых рецепторов
на эозинофильных гранулоцитах крови
2.3.6. Выделение ДНК
2.3.7. Исследование аллельного полиморфизма генов цитокинов и их

рецепторов
2.3.8. Определение CD3+ и CD20+ лимфоцитов в периферической крови
2.4. Статистический анализ результатов исследования
Глава 3. Результаты исследования
3.1. Количественные показатели лейкоцитарного звена у больных туберкулезом легких
3.2. Содержание IL-5 и эотаксина в крови у больных туберкулезом легких
3.3. Содержание IL-5 в супернатантах культуральных суспензий эозинофильных гранулоцитов у больных туберкулезом легких
3.4. Содержание IL-5RA- и ССИЗ-позитивных клеток в in vitro культуре эозинофилов крови у больных туберкулезом легких
3.5. Анализ распределения генотипов и аллельных вариантов генов цитокинов и их рецепторов у больных туберкулезом легких
3.6. Связь аллельного полиморфизма иммунорегуляторных генов с содержанием цитокинов в крови и IL-5RA- и ССКЗ-позитивных клеток в
in vitro культуре эозинофилов крови у больных туберкулезом легких
3.7. Содержание CD3+ и CD20+ лимфоцитов и IFN-y в крови у больных
туберкулезом легких
Г лава 4. Обсуждение результатов исследования
Заключение
Выводы
Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АПК - антигенпрезентирующая клетка
АМК - активные метаболиты кислорода
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа
ДК - дендритная клетка
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДТЛ - диссеминированный туберкулез легких
ИТЛ - инфильтративный туберкулез легких
ИФА - иммуноферментный анализ
КСФ - колониестимулирующий фактор
МВТ - микобактерии туберкулеза
МСБ - маннозо-связывающий белок
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота
ОКЛ - общее количество лейкоцитов
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
п.о. - пара оснований
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ТАЕ-буфер — трис-ацетатный буфер
ТВЕ-буфер - трис-боратный буфер
ТЛ - туберкулез легких
ФГА - фитогемагглютинин
ЦТЛ - цитотоксические Т-лимфоциты
BCG (Bacillus Calmette-Guerin) - бацилла Кальметта-Fерена CCR3 (С-С chemokine receptor type 3) - хемокиновый рецептор типа 3 CD (clusters of differentiation) - дифференцировочные антигены dNTP - дидезоксинуклеотидтрифосфат
ЕСР (eosinophil cationic protein) - эозинофильный катионный протеин EDN (eosinophil-derived neurotoxin) - эозинофильный нейротоксин ЕРО (eosinophil peroxidase) - эозинофильная пероксидаза

является облигатным фактором трансэндотелиальной миграции эозинофилов в легочную ткань, но может участвовать в трансэпителиальном пути проникновения в просвет дыхательных путей, тогда как присутствие IL-5 способствует доступности периферического пула эозинофилов и выделению других хемотаксических факторов, в том числе эотаксина [Huaux F. et al., 2005; Haley K.J. et al., 2008; Lewis Т. C. et al., 2012].
Повышенная экспрессия эотаксина в легочной ткани была выявлена также у больных бронхиальной астмой. Количество клеток, экспрессирующих мРНК эотаксина, в слизистой бронхов у этих пациентов достоверно коррелировало с эозинофилией дыхательных путей, бронхиальной гиперреактивностью и тяжестью клинических симптомов. Увеличение экспрессии мРНК эотаксина и соответствующего белка было зарегистрировано также при хроническом синусите и сезонном аллергическом рините [Huaux F. et al., 2005; DeBrosse C. W. et al., 2008; Lewis Т. C. et al., 2012].
Наряду с этим, высокий уровень экспрессии эотаксина и его м-РНК был отмечен в кишечнике при язвенном колите и болезни Крона, что определяет молекулярные механизмы накопления эозинофильных гранулоцитов при этих заболеваниях. Высокий уровень эотаксина прямо коррелирует со степенью эозинофилии крови и тканей также при болезни Ходжкина [Lintomen L. et al., 2007; Ahrens R. et al., 2008; Manousou P. et al., 2010; Zafra M. P. et al., 2012].
Эотаксин оказывает свое действие через специфический рецептор CCR3, который включает семь трансмембранных доменов, связанных с G-белками. CCR3 экспрессирован в основном на эозинофильных гранулоцитах, а также на базофилах, тимоцитах, эндотелиальных клетках и Т-лимфоцитах. Экспрессия CCR3 на ТЪ2-лимфоцитах представляет особый интерес, поскольку эти клетки регулируют накопление эозинофильных гранулоцитов в очаге воспаления. Ген CCR3 человека находится на хромосоме Зр21 в 285 КЬ регионе от генов CCR1 и CCR2 [Bullock J.Z. et al., 2007; Miyagaki T. et al