Роль регуляторных Т-клеток в иммунопатогенезе туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью

• Автор: Чурина, Елена Георгиевна
• Шифр специальности: 14.03.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 273 с. : 26 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика туберкулезной инфекции

1.1.1. Туберкулез. Современные представления, этология, эпидемиология

1.1.2. Особенности основных клинических форм туберкулеза легких

1.1.3. Иммунопатогенез туберкулеза легких

1.1.4. Лекарственная устойчивость при туберкулезе легких

1.2. Механизмы формирования иммуносупрессии при туберкулезе легких

1.2.1. Роль регуляторных Т-клеток в норме и при патологии
1.2.2. уЗТ-лимфоциты - клетки-регуляторы врожденного и адаптивного иммунитета
1.2.3. Апоптоз и его роль в иммунопатологических процессах. Регуляторные Т-клетки как активаторы апоптоза
1.3. Роль CD45R0+ Т-клеток памяти в эффективности вторичного иммунного ответа..
1.4. Молекулярно-генетические аспекты туберкулеза легких
1.4.1. Структурные основы функционального полиморфизма генов цитокинов
1.4.2. Связь полиморфизма промоторных регионов генов цитокинов с развитием заболеваний
ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Общая характеристика клинического материала
2.2. Материал исследования
2.3 Методы исследования
2.3.1. Техника проведения пробы Манту (приказ Минздрава РФ №229 от 27 июня 2001 года)
2.3.2. Определение общего количества лейкоцитов в периферической крови
2.3.3. Подсчёт лейкоцитарной формулы
2.3.4. Исследование секреции цитокинов мононуклеарными лейкоцитами периферической крови in vitro
2.3.4.1. Культивирование мононуклеарных лейкоцитов периферической
крови
2.3.4.2. Иммуноферментный анализ для количественного определения содержания цитокинов
2.3.5. Определение иммунологических фенотипов регуляторных Т-клеток крови методом проточной цитометрии
2.3.5.1. Определение количества CD4+CD25+Foxp3+, CD4+CD25+Foxp3', CD4+CD25" Foxp3+ регуляторных Т-клеток в периферической крови
2.3.5.2. Определение количества CD3+CD4+CD25' Т-хелперов и CD3+CD4'CD25+, CD3+CD4+CD25+hl регуляторных Т-клеток в периферической крови
2.3.5.3. Определение количества регуляторных Т-клеток крови, экспрессирующих ySTCR
2.3.6. Определение количества лимфоцитов крови, экспрессирующих CD45R0
2.3.7. МТТ-тест для оценки пролиферативной активности лимфоцитов
2.3.8. Оценка пролиферации и апоптоза лимфоцитов методом проточной цитометрии
2.3.9. Выделение ДНК
2.3.9.1. Исследование полиморфизма генов цитокинов
2.3.10. Статистический анализ результатов исследования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ЗЛ. Результаты оценки пробы Манту у больных туберкулезом легких
3.2. Характеристика лейкоцитарного звена у больных туберкулезом легких
3.2.1. Количественные показатели лейкоцитарного звена у больных туберкулезом легких
3.2.1.1. Характеристика показателей лейкоцитарного звена у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания
3.2.1.2. Характеристика показателей лейкоцитарного звена у больных туберкулезом легких в зависимости от результатов пробы Манту
3.2.1.3. Характеристика показателей лейкоцитарного звена у больных туберкулезом легких в зависимости от чувствительности возбудителя к противотуберкулезным препаратам
3.2.1.4. Содержание CD3+CD4+CD25‘ Т-лимфоцитов-хелперов в периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания, результатов пробы Манту и чувствительности возбудителя к
противотуберкулезным препаратам
3.3. Субпопуляционный состав регуляторных Т-клеток периферической крови у больных туберкулезом легких
3.3.1. Субпопуляционный состав регуляторных Т-клеток периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания
3.3.2. Субпопуляционный состав регуляторных Т-клеток периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и результатов пробы Манту
3.3.3. Субпопуляционный состав регуляторных Т-клеток периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и чувствительности возбудителя к противотуберкулезным препаратам
3.4. Содержание CD45R0+ Т-клеток памяти в периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания, результатов пробы Манту и чувствительности возбудителя к противотуберкулезным препаратам
3.5. Параметры апоптоза и пролиферативной активности лимфоцитов крови у больных туберкулезом легких
3.5.1. Пролиферативная активность лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и чувствительности возбудителя к основным противотуберкулезным препаратам (по данным МТТ-теста)
3.5.2. Показатели пролиферации и апоптоза лимфоцитов периферической крови у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и чувствительности возбудителя к основным противотуберкулезным препаратам (по данным проточной цитометрии)
3.6. Продукция цитокинов in vitro у больных туберкулезом легких
3.6.1. Продукция IL-2 и (FNy in vitro у больных туберкулезом легких
3.6.1.1. Продукция IL-2 и EFNy in vitro у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания
3.6.1.2. Продукция IL-2 и IFNy in vitro у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и результатов пробы Манту
3.6.1.3. Продукция IL-2 и IFNy in vitro у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и чувствительности возбудителя к противотуберкулезным препаратам
3.6.2. Продукция IL-4, IL-10 и TGF-p in vitro у больных туберкулезом легких

3.6.2.1. Продукция 1L-4, IL-10 и TGF-P in vitro у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания
3.6.2.2. Продукция IL-4, IL-10 и TGF-P in vitro у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и результатов пробы Манту
3.6.2.3. Продукция IL-4, EL—10 и TGF-P in vitro у больных туберкулезом легких в зависимости от формы заболевания и чувствительности возбудителя к противотуберкулезным препаратам
3.7. Аллельные варианты и генотипы генов цитокинов у больных туберкулезом легких
3.8. Связь аллельного полиморфизма иммунорегуляторных генов с цитокинопродукцией in vitro
ГЛАВА 4. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИММУНОСУПРЕССОРНЫХ МЕХАНИЗМОВ И РОЛЬ РЕГУЛЯТОРНЫХ Т-КЛЕТОК В ИХ РЕАЛИЗАЦИИ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ ЛЕГКИХ
4.1. Общая характеристика специфических и неспецифических механизмов супрессии иммунного ответа при туберкулезе легких
4.2. Роль регуляторных Т-клеток в иммунопатогенезе множественно лекарственноустойчивого туберкулеза легких
4.3. Т-клетки памяти - эффекторы вторичного иммунного ответа на М. tuberculosis
4.4. Прогноз множественной лекарственной устойчивости у больных туберкулезом легких
4.5. Активация апоптоза и угнетение пролиферации лимфоцитов как иммуносупрессорные эффекты регуляторных Т-клеток при множественно лекарственно-устойчивом туберкулезе легких
ГЛАВА 5. ОСОБЕННОСТИ ЦИТОКИНОВОЙ РЕГУЛЯЦИИ ИММУННОГО ОТВЕТА И РОЛЬ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ В РАЗВИТИИ
ЕЕ НАРУШЕНИЙ У БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ
РЕЗЮМЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

соавт., 2007; Суслов А.П. и соавт., 2006; An Р. et al., 2003]. IFN-y является самым сильным индуктором дендритных клеток и макрофагов, в результате чего возрастает их фагоцитарная и микробицидная активность, усиливаются мембранные процессы, биосинтез N0 и кислородных радикалов, проявляется антигенпрезентирующая функция, а также способность макрофагов секретировать белки системы комплемента и цитокины. IFN-y активирует NK-клетки, в результате чего усиливается цитолиз клеток-мишеней. Кроме того, он повышает экспрессию молекул HLA I и HLA II на различных клетках, способствуя презентации антигена Т-лимфоцитам [Nandi В., Behar S.M., 2011; Салина Т.Ю., Морозова Т.И., 2010; Сахарова И.Я., 2005; Кашкин К.П., 1998].
IFN-y играет ведущую роль в генезе индуцированной туберкулезным антигеном в ткани легкого гранулемы посредством экспрессии адгезивных молекул и хемокинов, необходимых для рекрутирования моноцитов/ макрофагов в очаг воспаления [Воронкова О.В. и соавт., 2007]. Известно, что уровень IFN-y в плазме крови больных туберкулезом в активную фазу заболевания значительно повышен по сравнению с показателями у здоровых лиц. Большинство авторов склонно считать это показателем активности специфического процесса [Шкарин A.B. и соавт., 2008]. Многочисленными экспериментальными исследованиями было показано, что недостаточная продукция IFN-y ведет к неспособности организма ограничивать рост и размножение внутриклеточных микобактерий, и заболевание протекает тяжело, нередко с осложнениями и имеет неблагоприятный исход. В то же время более высокий уровень спонтанной и индуцированной продукции IFN-y предопределяет и более благоприятный исход туберкулезного процесса [Кетлинский С.А., Симбирцев A.C., 2008; Tso H.W. et al., 2005].
Одним из индуцибельных медиаторов, синтезирующихся только в условиях воспаления и иммунного ответа, является IL-2, продуцируемый преимущественно Th 1-лимфоцитами [Симбирцев A.C., 2011]. IL-2 является основным аутокринным ростовым фактором и стимулятором Т-лимфоцитов. Он ответствен за пролиферацию Т-клеток, естественных киллеров, дифференцировку Т-лимфоцитов, экспрессию IL-2-рецепторов на Т- и