Морфологические и иммуногистохимические особенности опухолей человека с мутацией рецептора эпидермального фактора роста

• Автор: Иванцов, Александр Олегович
• Шифр специальности: 14.03.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 84 с. : 22 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.1. Факторы прогноза при раке лёгкого

1.1.2. Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR)

1.1.3. Ki-
1.1.4. Bcl-
1.1.5. Р—

1.1.6. Рецепторы эстрогена (ER)

1.2.1. Светлоклеточный рак почки

1.2.2. Особенности иммуногистохимической экспрессии маркеров Р-53, Bcl-2, Ki-67, ER в светлоклеточном раке почки
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Сравнительный анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров пролиферации и апоптоза, таргетных маркеров в аденокарциномах лёгкого с мутацией и без мутации гена EGFR
3.1.1. Клинические данные
3.1.2. Определение мутационного статуса гена EGFR
3.1.3. Экспрессия Ki-
3.1.4. Экспрессия Р-
3.1.5. Экспрессия Вс
3.1.6. Экспрессия ER- а
3.1.7. Экспрессия EGFR
3.2. Сравнительный анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров пролиферации и апоптоза, таргетных маркеров в
светлоклеточном раке почки с мутацией гена EGFR

3.2.1. Клинические данные
3.2.2. Определение мутационного статуса гена ЕвРЯ
3.2.3. Экспрессия иммуногистохимических маркеров (Кл-67, Р-53, Вс1 2, рецепторы эстрогена альфа) в светлоклеточном
почечноклеточном раке почки с мутацией ЕОРЯ в 19 экзоне
Глава IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы. В настоящее время во всем мире, в том числе и в России, онкологические заболевания являются одной из самых частых причин инвалидизации и смертности трудоспособного населения. В связи с этим, в настоящее время многие исследования сосредоточены на поиске новых подходов к противоопухолевой терапии.
В последние годы в качестве лекарственной мишени (таргетная терапия) изучается рецептор эпидермального фактора роста (epidermal growth factor receptor - EGFR), как молекулярный фактор, ответственный за митогенную активность опухолевого роста. EGFR - трансмембранный гликопротеин молекулярной массой 170 kD, обладающий тирозинкиназной активностью. EGFR (или HER1) относится к семейству рецепторов эпидермального фактора роста, которое таюке представлено другими его видами: erbB2/HER2-neu; erbB3/HER3 и erbB4/FIER4. EGFR экспрессируется на поверхности как нормальных, так и трансформированных эпителиальных клеток, а также участвует в регуляции клеточного роста и дифференцировки. Гиперэкспрессия EGFR опухолевыми клетками ассоциируется с поздними стадиями и метастатическим фенотипом заболевания, коррелирует с плохим прогнозом, резистентностью к проводимой лекарственной и лучевой терапии. Наиболее хорошо гиперэкспрессия EGFR изучены в бронхиолоальвеолярных аденокарциномах легких, инвазивном раке молочной железы, раке толстой кишки, раке предстательной железы.
Ингибиторы EGFR - группа препаратов, которые конкурентно связываясь с активными точками тирозинкиназы С (интрацеллюлярная часть) блокируют процесс фосфорилирования, и тем самым препятствуют фосфорилированию бслков-переносчиков сигналов. Одним из ингибиторов EGFR является Гефитиниб (Иресса). Он одобрен в 2003 г. Управлением по контролю качества продуктов и лекарств США для лечения химиорезистентного диссеминированного немелкоклеточного рака лёгкого.

Уровень экспрессии ЕвРЯ осуществлялся путём суммарной оценки выраженности окрашивания мембраны опухолевой клетки и общего числа позитивно окрашенных клеток. Случай расценивался как позитивный, если имело место любое по интенсивности окрашивание более 10 % опухолевых клеток. При окрашивании менее 10 % опухолевых клеток результат расценивался как нулевой. Слабая реакция более, чем у 10 % опухолевых клеток с мембраной окрашенной не полностью расценивалась как «1+», при слабом или умеренном окрашивании всей мембраны более, чем у 10 % опухолевых клеток - «2+», интенсивное окрашивание всей мембраны более, чем 10 % опухолевых клеток - «3+». Окрашивание цитоплазмы опухолевой клетки не учитывалось.
Определение мутации ЕОЕ1С
Для проведения анализа на наличие мутации были использованы парафиновые блоки, полученные из первичной опухоли. Срезы 15 мкм с парафиновых блоков, прошедших морфологическую верификацию на наличие опухолевой ткани, наносились на предметные стекла. Выделение опухолевых клеток производилось методом стереотактической диссекции под контролем световой микроскопии со срезов, содержавших более 40 % опухолевых клеток. Для получения ДНК из срезов парафиновых блоков использовалась следующая методика (Гтуапйоу Е., 2001):
- депарафинизация: дважды инкубация в ксилоле (500мкл) при комнатной температуре или 37°С, один раз - в 96 % этаноле (по 20-30 мин.);
- лизис в 200 мкл лизирующего буфера: 1хТЕ (Юммоль Тпз-НС1 (рН=8,0), 0,1 ммоль ЭДТА; рН=8,0), 2 % натрия додецилсульфат + 3,5 мкл протеиназы К (на ночь), при 6О0С, до полного лизиса ткани, можно добавить дополнительную порцию протеиназы К (3,5 мкл) утром;