Применение стволовых клеток при возрастной нейродегенеративной патологии (экспериментальное исследование)

• Автор: Анисимов, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 14.01.30
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 352 с. : 82 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИИ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Возрастная нейродегенеративная патология

1.2. Этиология и клиника болезни Паркинсона

1.3. Существующие методы терапии болезни Паркинсона

1.4. Клеточная терапия болезни Паркинсона

1.4.1. Трансплантация эмбрионального и взрослого донорского клеточного материала

1.4.1.1. Трансплантация эмбрионального/фетального клеточного материала

1.4.1.2. Альтернативные источники клеточного материала. Трансплантация других типов донорского клеточного материала
1.4.2. Применение стволовых и прогениторных клеток
1.4.2.1. Типы стволовых и прогениторных клеток
1.4.2.2. Применение соматических стволовых и прогениторных клеток
1.4.2.2.1. Применение нейральных стволовых и прогениторных клеток
1.4.2.2.2. Применение стволовых клеток костного мозга
1.4.2.2.3. Применение соматических стволовых клеток из прочих источников
1.4.2.3. Применение неонатальных, фетальных и эмбриональных стволовых клеток
1.4.2.3.1. Применение неонатальных стволовых клеток
1.4.2.3.2. Применение фетальных стволовых клеток
1.4.2.3.3. Применение клеток эмбриональной карциномы
1.4.2.3.4. Применение эмбриональных половых клеток
1.4.2.3.5. Применение эмбриональных стволовых клеток
1.5. Риски и перспективы клеточной терапии болезни Паркинсона
1.5.1. Онкологические риски
1.5.2. Риск развития ксенозоонозов
1.5.3. Иммунологические риски
1.5.4. Хирургические риски
1.5.5. Генетические риски
1.5.6. Этические факторы
1.6. Сравнительный анализ разных типов стволовых и прогениторных клеток как субстрата клеточной терапии
1.7. Заключение
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Животные и их содержание
2.1.1. Животные, использованные для получения культур фидерных (питающих) клеток
2.1.2. Животные, использованные в экспериментах по трансплантации клеточного материала
2.2. Препараты
При проведении экспериментов по трансплантации клеточного материала были использованы следующие препараты:
2.3. Методика культивирования и экспансии фидерных (питающих) и стромальных клеток разных типов
2.3.1. Методика работы с фидерными (питающими) клетками мыши
2.3.1.1. Методика выделения, культивирования и экспансии фидерных
(питающих) клеток мыши
2.3.1.2 Методика антимитотической обработки фидерных (питающих) клеток мыши
2.3.1.2.1 Методика антимитотической обработки фидерных (питающих) клеток мыши митомицином С
2.3.1.2.2 Методика антимитотической обработки фидерных (питающих) клеток мыши гамма-радиацией

2.3.1.3. Методика культивирования и экспансии стромальных клеток мыши
2.3.1.4. Методика подготовки к ко-культивированию стромальных клеток мыши со стволовыми клетками человека
2.3.1.5. Методика культивирования и экспансии культуры клеток печени мыши
2.3.2 Методика работы с фидерными (питающими) клетками человека..
2.3.2.1. Методика культивирования и экспансии фидерных (питающих) клеток человека
2.3.2.2 Методика антимитотической обработки фидерных (питающих)
клеток человека
2.4. Методика культивирования и экспансии стволовых клеток разных типов
2.4.1. Методика культивирования и экспансии стволовых клеток мыши.
2.4.1.1. Методика культивирования и экспансии эмбриональных стволовых клеток мыши линии R
2.4.1.2. Методика культивирования и экспансии эмбриональных стволовых клеток мыши линии D
2.4.1.3. Методика культивирования и экспансии клеток эмбриональной карциномы мыши линии Р
2.4.1.4. Методика культивирования и экспансии стволовых клеток мыши
линии EG-1, полученных из первичных половых клеток
2.4.2. Методика культивирования и экспансии стволовых клеток человека
2.4.2.1. Методика культивирования и экспансии эмбриональных стволовых клеток человека линии SA
2.4.2.2. Методика культивирования и экспансии эмбриональных стволовых клеток человека линии HUES-
2.4.2.3. Методика культивирования и экспансии эмбриональных стволовых клеток человека линии #

эмбрионалыюго/фетального клеточного материала у человека. Первыми реципиентами экспериментальных трансплантаций стали лица, страдающие тяжелыми осложнениями приема МФТП [59]. Следует особо указать, что в отличие от идиопатической БП, вторичный паркинсонизм, вызванный приемом МФТП (целенаправленным или случайным, как контаминапта мепередипа) поражает иной возрастной контингент: преимущественно лиц среднего возраста и молодых. При этом тяжелое поражение дофаминсргических нейронов головного мозга развивается очень быстро и является практически необратимым [158]. Попытки компенсировать развитие моторной симптоматики при помощи фармакотерапии во многих случаях оказываются малопродуктивными, и пацпеты видели в экспериментальной терапии единственную альтернативу иивалидизации как исходу наркотической интоксикации (иногда однократной). Фактически же, вторичный паркинсонизм представлял собой в таких случаях модель БП на поздних стадиях.
Первыми работами с практическим использованием возможностей заместительной клеточной терапии вторичного паркинсонизма, реже идиопатпчсского (БП), стали начатые в конце. 1980-х it. работы североамериканских и европейских (испанских и шведских) групп [241, 304, 334, 345, 349, 425, 561]. Сообщения о первых результатах были дополнены «промежуточным» анализом эффек тивности подхода [306, 333] и в совокупности оказали огромное влияние на научное и врачебное сообщество. Результаты этой и последующих серий трансплантаций человеческого клеточного материала пациентам, с более детальным анализом технических аспектов трансплантационных процедур [27, 29, 183, 224, 227, 330, 432], позволили сделать ряд важнейших выводов. Прежде всего, основанная па использовании человеческого эмбрионалыюго/фетального клеточного материала (дофаминергических нейронов и их предшественников, выделенных из мезенцефалона (среднего мозга) плода) заместительная клеточная терапия действительно