Совершенствование лабораторного тестирования для обеспечения вирусной безопасности аллогенных гемокомпонентов

• Автор: Белякова, Вера Владимировна
• Шифр специальности: 14.01.21
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 116 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ДОНОРСТВО КРОВИ И МЕТОДЫ ОБЕСПЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОЙ БЕЗОПАСНОСТИ ГЕМОТРАНСФУЗИЙ В РОССИИ И РАЗВИТЫХ СТРАНАХ ЕВРОПЫ, АЗИИ И АМЕРИКИ

1.1 Социально - значимые трансфузионно - трансмиссивные инфекции

1.2 Риск инфицирования гемотрансмиссивными инфекциями

1.3 Нормативные документы по предупреждению инфицирования при переливании компонентов крови

1.4. Лабораторные методы детекции маркеров гемотрансмиссивных инфекций

1.5. Место и роль технологии карантинизации в современных условиях.

1.6.Современные методы вирусинактивации в обеспечении вирусной

безопасности донорской крови
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Характеристика доноров крови и ее компонентов
2.2. Скрининговые и подтверждающие методы исследований
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Частота выявления серологических маркеров инфекций
3.2. Результаты ИАТ - тестирования донорской крови
3.3. АЬТ и маркеры инфекций
ГЛАВА IV. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛАБОРАТОРНОЙ АПРОБАЦИИ ДОНОРСКОЙ КРОВИ И ОРГАНИЗАЦИИ ЛАБОРАТОРНОГО ПРОЦЕССА
4.1. Остаточные риски инфицирования гемотрансмиссивными инфекциями
4.2. Оптимизация аналитического этапа лабораторного процесса
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы
Обеспечение безопасности аллогенных гемотрансфузий является одним из самых актуальных вопросов трансфузионной медицины. Гемотрансфузионная терапия широко применяется в травматологии, хирургии, гематологии, акушерской практике для восполнения кровопотери и коррекции геморрагического, анемического и иммунодефицитного синдромов. Вместе с тем, переливание компонентов крови остается одним из ведущих вариантов артифициального пути передачи трансфузионно - трансмиссивных инфекций (ТТИ), наиболее опасными из которых считают НГУ-инфекцию и вирусные гепатиты С и В.
В настоящее время в большинстве стран мира сложилась регламентированная практика обеспечения безопасности гемокомпонентной терапии, включающая в себя ряд последовательных действий: формирование донорских кадров, медицинское освидетельствование потенциального донора, лабораторное тестирование на декретированные показатели. Лабораторная апробация донорской крови занимает в этом ряду одно из наиболее важных мест, поэтому все больше внимания уделяется качеству лабораторных исследований в скрининговых лабораториях Службы крови.
Изучение антигенной структуры возбудителей инфекций привело в свое время к созданию специфических методов серодиагностики ТТИ и позволило впервые подойти к решению проблемы инфекционной безопасности гемотрансфузий. Совершенствование диагностических тест-систем (повышение их чувствительности, создание ангиген-антительных диагностикумов) способствовало более раннему выявлению инфекции за счет сокращения периода «серологического, диагностического окна»: для Н1У-инфекции с 22 до 12 дней; для гепатита С с 66 до 48 дней [90,147,154].
В большинстве скрининговых лабораториях Службы крови исследование образцов крови доноров проводят методами иммунохемилюминисцентного (ИХЛА) или иммуноферментного анализа (ИФА) - с определением

серологических маркеров гемотрансмиссивных инфекций: антиген/антител к HIV -1, HIV -2; антител к вирусу гепатита С; антител к антигенам возбудителя сифилиса (Treponema pallidum) и поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg). Компоненты крови с ограниченным сроком хранения: тромбоконцентрат, эритромасса, эритровзвесь, не содержащие маркеров ТТИ выдают непосредственно в лечебно-профилактические учреждения (ЛПУ), а свежезамороженную плазму (СЗП) помещают на карантинное хранение сроком на 6 месяцев. По окончании срока карантинизации плазмы и повторного обследования донора с определением маркеров ТТИ СЗП поступает для клинического использования в ЛПУ или на производство препаратов крови. Использование высокочувствительных серологических методов обеспечивает достаточно высокий уровень безопасности гемокомпонентов, однако, в мировой практике встречались случаи посттрансфузионного заражения реципиентов компонентами крови при отрицательных результатах серологического тестирования. Известны случаи HCV - инфекции с длительным периодом «серологического окна» при наличии в крови РНК вируса гепатита С (HCV), например, у доноров с иммуносупрессией или случаи отсутствия антител к HCV у иммуно дефицитных доноров [80,105,140]. Кроме того, существование «молчащей» формы гепатита В, характеризующейся низкой концентрацией вируса в крови при не детектируемом уровне HBsAg или наличие так называемых «ускользающих» мутантов HBsAg [2,136], может быть причиной ложноотрицательных результатов как при первичном скрининге донорской крови на HBsAg, так и при повторном обследовании донора по окончании срока карантинизации плазмы.
Возможность прямого выявления в донорской крови вирусной РНК (ДНК) NAT-методами позволила существенно сократить период «диагностического окна» и, тем самым, уменьшить риск посттрансфузионного заражения реципиента [117,171,172]. В связи с этим, для повышения вирусной безопасности компонентов крови в лабораторную практику Службы крови ряда стран (США, Австралия, Германия, Австрия, Голландия и др.) были введены методы

Аналогичную картину можно наблюдать у иммунодефицитных доноров, при приеме лекарственных препаратов - стероидных и нестероидных противовоспалительных препаратов [45,46,89].
Возникла необходимость в карантинизации плазмы с целью повторного обследования донора через 6 мес. и получения достоверных результатов о здоровье донора и качестве плазмы.
По данным Люляевой О.Д. и соавт., 2001 г., внедрение метода
карантинизации плазмы позволило за 2 года изъять 9 литров инфицированной плазмы, что предотвратило заражение не менее 30 реципиентов [34].
На первый взгляд убедительные данные, если не считать, что работа выполнялась в конце 90-х годов. В результатах карантинизации среди первичных доноров выявлено в общей сложности 2,21 % носителей маркеров инфекций, что явно мало, если сопоставлять с результатами тестирования современными тест-системами ИФА 4-го поколения: 7,89 % для первичных доноров и 1,18 % для повторных [11].
Карантинизация несомненно повышает вирусную безопасность плазмы. В то же время ожидать, что каждого донора удастся повторно обследовать по истечении 6 месяцев после донации, не реально. Даже кадровые доноры плазмы далеко не всегда приходят на повторное обследование даже после письменного вызова. Повторный контакт с первичными донорами еще более проблематичен [62]. В учреждениях службы крови России в течение 2007-2011 гг. объем заготовки карантинизированной плазмы увеличился в 1,7 раз. Применение метода карантинизации СЗП сопровождается выбраковкой по результатам повторного обследования доноров до 3,6% компонентов крови, до 14,8 % хранящейся плазмы снимается с карантина из-за неявки донора [67].
В документе: «Методические рекомендации по лабораторному
предупреждению передачи HIV при переливании крови и ее компонентов», утвержденном Минздравсоцразвития РФ 24.09.2007 г. № 7067-РХ в разделе «Карантинизации свежезамороженной плазмы» предписывается «При неявке донора для повторного обследования за три месяца до истечения срока хранения