Вирусы папиллом человека при раке мочевого пузыря: методы детекции, частота обнаружения, морфологические и клинические особенности заболевания

• Автор: Головина, Дарья Андреевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристики вирусов папиллом. Основные 12 механизмы опухолеродного действия ВПЧ типов высокого онкогенного риска

1.1.1. Таксономия и структура вирусов папиллом

1.1.2. Строение генома ВПЧ

1.1.3. Пути заражения ВПЧ 1V

1.1.4. Этапы инфицирования эпителиальной клетки ВПЧ

1.1.5. Основные свойства онкобелков Е6 и Е7 вирусов папиллом 22 человека типов высокого онкогенного риска
1.1.6. Формы злокачественных опухолей, этиологически связанные 25 с ВПЧ высокого риска
1.1.7. Клинические особенности ВПЧ-позитивных инвазивных 25 карцином по сравнению с ВПЧ-негативными карциномами тех же локализаций
1.2. Вирусы папиллом человека и рак мочевого пузыря
1.2.1. ВПЧ как фактор риска при РМП
1.2.2. Источники противоречивости данных о роли ВПЧ в 34 индукции РМП
1.2.3. Попытки исследовать роль вирусов папиллом в 35 уротелиальном канцерогенезе на экспериментальных моделях
1.2.4. Возможные перспективы для практической онкоурологии
1.3. Феномен гиперэкспрессии клеточного белка р16|ЫК4а в
опухолях, индуцированных ВПЧ
1.3.1. р 1 б1!ч|К4а - диагностический маркер рака шейки матки
1.3.2. Использование иммуногисто-/цитохимической детекции
белка р1611чк4а в качестве маркера при других ВПЧ-ассоциированных формах рака
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клинические материалы
2.2. Выделение ДНК и РЕПС
2.2.1. Выделение ДНК и РНК из образцов ткани
2.2.2. Определение концентрации и качества ДНК и РНК
2.2.3. Выделение ДНК из парафиновых блоков
2.3. Скрининг образцов уротелия мочевого пузыря на присутствие ДНК ВПЧ
2.3.1 Полимеразная цепная реакция
2.3.2 Электрофоретическое разделение продуктов ПЦР в агарозном геле
2.3.3 Определение типа вируса в ДНК ВПЧ-позитивных образцах: рестрикционный анализ
2.4 Изучение экспрессии вирусных генов Еб и Е7 ВПЧ 16 типа и клеточного гена, кодирующего р16114к4а, на уровне мРНК
2.4.1 Реакция обратной транскрипции
2.4.2 Полуколичественная полимеразная цепная реакция
2.4.3 Проявление продуктов ПЦР с помощью радиоактивной метки
2.5 Иммуногистохимическая детекция вирусного онкобелка Е7 ВПЧ16 и клеточного белка р161Ж4а
2.5.1 Гистологические образцы
2.5.2 Иммуногистохимическое окрашивание белка р161КК4л
2.5.3 Иммуногистохимическая детекция онкобелка Е7 ВПЧ
2.5.4 Интерпретация результатов
2.6 Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Скрининг образцов РМП на наличие генетического материала 69 ВПЧ; типирование вируса в положительных образцах
3.1Л Скрининг образцов уротелия мочевого пузыря на присутствие 69 ДНК ВПЧ
3 Л .2 Типирование ВПЧ в образцах РМП, содержавших ДНК 7О
вируса
3 Л .3 ПЦР-анализ присутствия гена Е7 ВПЧ 16 в образцах РМП
3 Л .4 Исследование образцов нормального уротелия на
присутствие генетического материала ВПЧ
3.2 Изучение экспрессии вирусных онкогенов Е6 и Е7 на уровне 74 мРНК в ДНК ВПЧ 16-позитивных образцах РМП
3.2Л Изучение экспрессии онкогена Еб ВПЧ 16
3.2.2. Изучение экспрессии онкогена Е7 ВПЧ16
3.3 Экспрессия белка Е7 ВПЧ 16 типа в образцах РМП
3.4 Экспрессия клеточного гена ШК4а в образцах ракового и 79 условно-нормального уротелия мочевого пузыря
3.4.1 Результаты изучения экспрессии ШК4а на уровне мРНК
3.4.2. Результаты иммуногистохимической детекции белка р 1 бШК4а 83 в ДНК ВПЧ 16-позитивных образцах РМП
3.5. Клинический случай с утратой ВПЧ-позитивности РМП
3.6 Морфологические и клинические особенности ВПЧ-позитивного

Глава 4 ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

E6 и Е7 ВПЧ типов высокого риска. Наконец, помимо лабораторной контаминации исследуемых образцов продуктами амплификации вирусного генома, которая в подобных исследованиях нередко дает ложно-положительные результаты, при РМП не исключена также контаминация «внутри организма»: в случае инфекции ВПЧ соседних органов, - вульвы, полового члена, - случайное попадание одной или нескольких клеток из этих органов в мочевой пузырь (с током крови во время операции, на наружной поверхности эндоскопа при цистоскопии и т.д.) может дать ложно-положительный результат как при скрининге ткани мочевого пузыря с помощью ПЦР на присутствие ДНК ВПЧ, так и при проверке экспрессии вирусных онкогенов на уровне мРНК методом ОТ-ПЦР.
Таким образом, для изучения возможного участия ВПЧ в уротелиальном канцерогенезе целесообразно применять комплексный подход. Выявление генетического материала вируса желательно проводить методами, дающими возможность обнаруживать не только ВПЧ 16 и ВПЧ 18, но и ВПЧ иных типов. Проверку экспрессии онкогенов Е6 и Е7 ВПЧ в ДНК ВПЧ-позитивных образцах целесообразно проводить как на уровне мРНК Е6/Е7 с помощью ОТ-ПЦР, так и иммуногистохимически на уровне соответствующих онкобелков. У женщин, больных РМП, желательно проверять наличие ДНК и белков ВПЧ в эпителии шейки матки.
1.2.3. Попытки исследовать роль вирусов папиллом в уротелиальном канцерогенезе на экспериментальных моделях
Как отмечалось выше, мочевой пузырь выстлан изнутри эпителием особого типа, - переходным. Вопрос о том, способны ли вирусы папиллом вызывать онкогенез в эпителии данного типа, представляет не только практический, но также и теоретический интерес.
In vivo эту проблему изучали М.Сатро с соавторами [36, 37]. Моделью им послужил крупный рогатый скот. Участие бычьего папилломавируса БГТВ-