Иммунофлуорецентный анализ общей и свободной форм простат-специфического антигена и других опухолевых маркеров в формате биочипа

• Автор: Соколова, Зинаида Александровна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : 27 ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Опухолевые маркеры и их роль в диагностике рака

1.1.1. Индивидуальные опухолевые маркеры

1.1.1.1. Простат-специфический антиген

1.1.1.2. Альфа-фетопротеин

1.1.1.3. Раково-эмбриональный антиген

1.1.1.4. Нейрон-специфическая енолаза

1.1.1.5. Хорионический гонадотропин
1.1.2. Комбинации опухолевых маркеров
1.2. Биологические микрочипы - новая технология в диагностике злокачественных новообразований
1.2.1. Белковые микрочипы
1.2.2. Белковые микрочипы для анализа опухолевых маркеров
1.3. Заключение
Глава 2. Материала и методы
2.1. Исследуемые группы и образцы сыворотки крови онкологических, неонкологических больных и здоровых доноров разного возраста
2.2.«Трехмерные» гидрогелевые белковые микрочипы для
иммунофлуоресцентного анализа опухолевых маркеров
2.3.Описание диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-
Биочип»
2.3.1. Набор реагентов «ОМ-Биочип (ПСА)»
2.3.2. Набор реагентов «ОМ-Биочип»
2.4. Приборное обеспечение
2.5. Одностадийный «сэндвич» - вариант иммуноанализа на биочипах
2.6. Сокращение времени проведения одностадийного «сэндвич»- варианта
иммуноанализа двух форм ПСА за счет перемешивания образца
2.7. Регистрация флуоресцентных сигналов
2.8. Обработка флуоресцентных изображений
2.9. Оценка аналитических характеристик диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип»
2.9.1. Оценка аналитических характеристик диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)»
2.9.1.1. Воспроизводимость анализа
2.9.1.2. Аналитическая чувствительность
2.9.1.3. Тест на «открытие»
2.9.1.4. Тест на линейность
2.9.1.5. Оценка хук эффекта
2.9.2. Оценка аналитических характеристик системы «ОМ-Биочип»
2.9.2.1. Воспроизводимость анализа
2.9.2.2.Тест на «открытие»
2.9.2.3.Тест на линейность
2.10. Твердофазный иммуноферментный анализ на 96-луночном планшете
2.11. Статистическая обработка данных
Глава 3. Результаты исследований
3.1. Оценка аналитических и диагностических характеристик системы «ОМ-
Биочип (ПСА)» в варианте одностадийного «сэндвич»-
иммуноанализа
3.1.1. Аналитические характеристики диагностической системы «ОМ-Биочип (ПСА)»
3.1.1.1. Воспроизводимость анализа
3.1.1.2. Аналитическая чувствительность
3.1.1.3. Проверка тест-системы «ОМ-Биочип (ПСА)» на наличие хук-эффекта в варианте одностадийного «сэндвич»-
иммуноанализа
3.1.1.4. Тест на «открытие»

3.1.1.5. Тест на линейность
3.1.1.6. Воспроизводимость измерений уровня ПСА в образцах сыворотки крови
3.2.1. Диагностические характеристики тест-системы
«ОМ-Биочип (ПСА)»
3.1.2.1. Создание банка образцов сывороток крови для проведения клинических испытаний тест-системы «ОМ-Биочип (ПСА)»
3.1.2.2. Тестирование образцов сыворотки крови здоровых доноров и больных различных исследуемых групп
3.1.2.3. Сравнение результатов измерения двух форм ПСА в тест-системах «ОМ-Биочип (ПСА) и ИФА-«БицгеЫо Diagnostics». Регрессионный анализ
3.1.2.4. Определение диагностической эффективности тест-системы «ОМ-Биочип (ПСА)»
3.2. Сокращение времени проведения одностадийного «сэндвич»- варианта иммуноанализа двух форм ПСА за счет перемешиванияобразца
3.3. Оценка аналитических и диагностических характеристик системы «ОМ-Биочип» в варианте одностадийного «сэндвич»- иммуноанализа
3.3.1. Аналитические характеристики диагностической системы «ОМ-Биочип»
3.3.1.1. Воспроизводимость анализа
3.3.1.2. Аналитическая чувствительность
3.3.1.3 Тест на «открытие»
3.3.1.4 Тест на линейность
3.3.2. Диагностические характеристики тест-системы «ОМ-Биочип»
3.3.2.1 Создание банка образцов сывороток крови для проведения
клинических испытаний тест-системы «ОМ-Биочип»
3.3.2.2. Тестирование образцов сыворотки крови здоровых доноров и больных различных исследуемых групп

помощью «сэндвич»-иммуноанализа. Были получены калибровочные кривые, проверена специфичность анализа каждого антигена, измерены концентрации антигенов в 14 образцах сывороток крови. Результаты, полученные с помощью микрочипов, хорошо коррелировали с результатами, полученными в стандартных ИФА-системах. Таким образом, была показана возможность использования микрочипов, нанесенных на дно стандартного 96-луночного планшета, для определения концентрации антигенов в сыворотке крови.
С помощью белковых микрочипов можно проводить поиск новых прогностических маркеров. Так Gao W.M. и соавторы [145] разработали белковый микрочип для поиска прогностических маркеров рака легкого. На микрочипах с 84 нанесенными антителами к сывороточным белкам было протестировано 80 образцов сыворотки крови (24 - больных с первично диагностированным раком легких; 24 - здоровых доноров и 32 - больных хроническими обструктивными заболеваниями легких). Было показано повышение уровней экспрессии С-реактивного белка, сывороточного амилоида А, муцина 1 и а-1-антитрипсипа. Большинство из этих белков не являются специфическими для изученных видов рака, и связаны с такими процессами, как травма, инфекция, воспаление и т.д. Авторы полагают, что они могут быть использованы, в дополнение к известным опухолевым маркерам.
В табл. 3 представлены новые маркеры, обнаруженные с помощью белковых микрочипов для рака легкого [145], предстательной железы [146], рака поджелудочной железы [147] и рака яичника [148].