ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ВАКЦИН МЕТОДОМ ELISpot

• Автор: Никитин, Кирилл Дмитриевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : 31 ил.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ

ELISpot — Enzyme-Linked ImmunoSpot — твердофазная модификация метода иммуноферментного анализа

FITC — флуоресцеинтиоцианат

MelKor — линия опухолевых клеток MelKor

PBS — фосфатно-буферный раствор

РЕ - (от англ. phycoerythrin) — фикоэритрин

АТ — антитела

аутоДК — аутологичные дендритные клетки (в данной работе - нагруженные аллогенным опухолевым лизатом)

ГЗТ — реакция гиперчувствительности замедленного типа

ГМ-КСФ — гранулоцигарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

гм-ОпК — генно-модифицированные аллогенные опухолевые клетки
ДК — дендритные клетки
ДМСО — диметилсульфоксид
ИЛ-1 р — интерлейкин-1 р
ИФН-у — интерферон-гамма
МНГТК - мононуклеары периферической крови
ОАА — опухолеассоциированные антигены
ОпК - опухолевые клетки
ОСА — опухолеспецифические антигены
ПЭГ — полиэтиленгликоль
РЭА — раково-эмбриональные антигены
ФГ А — фитогемагглютинин ФНО-а — фактор некроза опухолей а ЦТЛ — цитотоксические лимфоциты (СЭ8+) ЩФ — щелочная фосфатаза

Оглавление
СПИСОК ПРИНЯТЫХ В РАБОТЕ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Иммунотерапия злокачественных новообразований (обзор литературы)
1.1. Современное состояние иммунотерапии злокачественных опухолей
1.2. Дендритные клетки
1.3. Дендритомы
1.4. Меланома — клиническая и иммунологическая характеристика
1.5. Опухолевый маркер Б
1.6. Методы исследования иммунного ответа
1.6.1. Метод ЕЫБро!
1.6.2. Исследования иммунного ответа методом ЕЫБро!
ГЛАВА 2. Использованные материалы и методы исследования
2.1. Список использованных реагентов
2.2. Методы получения клеточного материала
1.6.3. Получение периферической крови и лейкоцитарной массы
1.6.4. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови и лейкоцитарной массы
1.6.5. Культивация незрелых дендритных клеток
1.6.6. Культивация опухолевых клеток линии Ме1Ког
2.3. Методы криоконсервации клеточного материала
2.3.1. Замораживание мононуклеарных клеток периферической крови 3
2.3.2. Размораживание мононуклеарных клеток периферической крови
2.4. Методы получения опухолевого лизата

- рекомбинантный человеческий фактор некроза опухолей а (ФНО-а)
- простагландин Е2 (ПГЕ2)
- раствор Версена
- набор ВСА Protein Assay Reagent Kit 23227 (Pierce)
- краситель PKH
- фосфатный буферный раствор (PBS)
- 1% раствор формалина
- моноклональные антитела к антигену CD11с, конъюгированые с фикоэритрином (РЕ), (Caltag, США)
- полиэтиленгликоль (ПЭГ) (Sigma, США)
- диагностическая тест-система для определения уровня маркера S100, CanAg Diagnostics, Швеция
- антитела к ИФН-у (Endogen, США),
- Tween 20 (Sigma, США)
- антитела к ИФН-у, меченные биотином (Endogen, США)
- щелочная фосфатазу (ExtrAvidin/AP)
- субстрат щелочной фосфатазы BCIP/NBT (Sigma, США)
2.2. Методы получения клеточного материала
1.6.3. Получение периферической крови и лейкоцитарной массы
Периферическую кровь получали путем пункции периферической вены больных меланомой, получавших иммунотерапию противоопухолевой вакциной на основе дендритных клеток, нагруженных лизатом. Лейкоцитарную массу получали методом лейкафереза в отделении