Альтернативные системы экспрессии рекомбинантного ИФН-alpha-2b

• Автор: Кособокова, Екатерина Николаевна
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 90 с. : 35 ил.

Содержание
Введение

Г лава 1. Обзор литературы

1.1 Общие сведения об интерферонах

1.2 Механизм действия

1.3 Биологические эффекты

1.4 Клиническое применение препаратов интерферона

1.5 Получение интерферонов

Глава 2. Материалы и методы

Глава 3. Результаты

3.1 Получение чИФН-а-2Ь из бактериального продуцента

3.2 Получение растительного продуцента чИФН-о;-2Ь
3.3 Определение биологической активности рекомбинантных белков,
полученных разными способами
Перспективы применения разработанных технологий
Выводы
Список литературы

Используемые сокращения GAF - gamma activation factor; фактор, активирующий транскрипцию ИФН-у-индуцируемых генов
GAS - gamma activation sequence; последовательность, участвующая в активации
транскрипции ИФН-у-пндуцируемых генов
DMSO - Dimethyl sulfoxide, Диметилсульфоксид
IPTG - изопропил-1 -тио-/3-Г>-галактозид
IRF - IFN-regulatory factor; фактор, регулируемый ИФН
ISGF - IFN-stimulated gene factor; фактор, стимулирующий транскрипцию ИФН-а-индуцируемых генов
ISRE - IFN-stimulated response element; чувствительная последовательность,
участвующая в активации транскрипции ИФН-се-индуцируемых генов
NK-клетки - natural killer; Естественные киллеры, натуральные киллеры
PEG - Polyethylene glycol, Полиэтиленгликоль
PMSF - фенилметилсульфонилфторид
RBS - ribosomal binding site; место связывания рибосомы
Cdk - cyclin-dependent kinase, циклин-зависимая киназа
STAT - сигнальные трансдукторы и активаторы транскрипции
БСА - бычий сывороточный альбумин
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота (кДНК - комплементарная ДНК)
ДТТ - дитиотрейэтол
ИЛ - интерлейкин
чИФР! - интерферон человека
ИФН-Р - рецептор интерферона
КТКЛ - кожная Т-клсточная лимфома
ПААГ - полиакриламидный гель
ПРК - протеинкиназы, индуцируемые 2-спиральной РНК
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭГ-ИФН — ИФН с молекулой полиэтиленгликоля
РНК - рибонуклеиновая кислота (иРНК - информационная РНК, тРНК -транспортная РНК, мРНК - матричная РНК)
ТВ - тельца включения Тх - хелперные Т-клетки (ТБ)
ХМЛ - хронический миелолейкоз ЦБ - целевой белок
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

Помимо этого искусственные хромосомы содержат центромерную и теломерную последовательности, которые являются специфичными для клеток хозяина. Эти элементы обеспечивают точную репликацию и распределение между дочерними клетками искусственных хромосом.
В качестве векторов в генной инженерии используют плазмиды и эписомы, хромосомы вирусов, а также фрагменты хромосом эукариотических клеток.
Оптимизация последовательности гена для экспрессии в системе продуцента.
На уровень экспрессии гетерологичных белков оказывает влияние частота встречаемости кодонов аминокислот, которая различна не только для крупных таксонов (эукариот и прокариот), но и для отдельных видов [Gouy et all, 1982; Ikemura, 1985]. Различные организмы показывают предпочтение одному из нескольких кодонов, которые несут информацию об одной и той же аминокислоте. Оптимальные кодоны позволяют быстрее достигнуть высокого уровня экспрессии и высокой точности. Существует несколько методов определения частоты использования того или иного кодона в конкретном организме [Suzuki, 2008], на основании которых разрабатываются программы, позволяющие оптимизировать последовательность гена целевого белка для экспрессии в определенной системе.
Предпочтительное использование синонимичных кодонов в том или ином организме не случайно и отражает количественную представленность отдельных изоакцепторных тРНК. Это может быть объяснено адаптацией высоко экспрессируемых генов к трансляционной эффективности. Трансляция чужеродной мРНК, содержащей редко встречающиеся кодоны, сопровождается временной задержкой синтеза белка, сдвигом рамок считывания и ошибочным включением аминокислотных остатков. При этом, отрицательный эффект проявляется сильнее всего при локализации неспецифичных кодонов в 5'-концевой части мРНК, кодирующей N-концевые аминокислотные остатки рекомбинантного белка.