Профилактика фототоксического действия эндовитреальных источников света (экспериментальное исследование)

• Автор: Казиев, Сабир Низамиевич
• Шифр специальности: 14.01.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 78 с. : 18 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Обзор литературы. Современное состояние проблемы биологической безопасности источников

эндовитреального освещения

1.1. Эндовитреальные осветители: эволюция вопроса и применяемые технические решения
1.2. Физические и биологические критерии безопасности источников эндовитреального освещения

1.3. Современные подходы к тестированию на биологическую безопасность источников

эндовитреального освещения, критическая

характеристика используемых в настоящее время клеточных тест-систем и экспериментальных животных

Глава 2. Материалы и методы экспериментальных исследований

2.1. Общая характеристика материалов исследования

2.2. Выбор источников эндовитреального освещения для экспериментального исследования
2.3. Экспериментальное исследование физических параметров источников эндовитреального освещения
2.4. Выделение и культивирование монослойной 2Б и сфероидной ЗЭ культуры клеток ретинального пигментного эпителия человека
2.5. Статистические методы исследования
Глава 3. Результаты экспериментальных исследований физических параметров источников эндовитреального освещения
3.1. Результаты экспериментальных исследований
физических параметров светового воздействия ксенонового и ртутного источников света
3.2. Результаты экспериментального исследования
светофильтра подобранного экспериментальным и расчетным путем
Глава 4. Результаты экспериментальных исследований
биологических параметров источников
эндовитреального освещения
4.1. Результаты экспериментальных исследований по биологической безопасности параметров светового воздействия ксеноновым и ртутным источниками света на монослойную 20 и сфероидную 30 культуры ретинального пигментного эпителия человека
4.2. Результаты фотозащитного действия светофильтра на монослойную 20 и сфероидную 30 культуры клеток ретинального пигментного эпителия человека
4.3. Результаты морфологического исследования
ультраструктуры клеток РПЭ после фототоксического действия ксенонового и ртутного источников света
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПФОС

EASC
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
активная форма кислорода ватт, единица измерения энергии интраокулярная линза инфракрасный люмен
международная патентная классификация оптическая когерентная томография перфторорганическое соединение ретинальный пигментный эпителий силиконовое масло стекловидное тело ультрафиолетовый центральная нервная система
Euro-asian council for standardization, metrology and certification (Евразийский совет по стандартизации, метрологии и сертификации)

2.4. Выделение и культивирование монослойной 2D и сфероидной 3D культуры клеток ретинального пигментного эпителия человека
Получение и культивирование первичных культур клеток ретинального пигментного эпителия человека
Клетки РПЭ получали из эксплантатов постмортального материала, предоставленного центром фундаментальных и прикладных медикобиологических проблем ФГБУ МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н.Федорова г.Москва. Клетки РПЭ человека культивировали в стандартных условиях (37°С, 5% С02) в полной ростовой среде DMEM/F12 (1:1) с добавлением глютамина (2ммоль/л), 1% пенициллина-стрептомицина, ростовых факторов и 7% эмбриональной телячьей сыворотки, замену среды производили каждые 2 дня. Перед заменой среды культуры РПЭ микроскопировали с помощью инвертированного светового микроскопа СКХ 41 (Olympus, Япония), оценивая степень конфлуэнтности, фоторегистрацию осуществляли с помощью цифровой камеры Invenio (Olympus, Япония). Если монослой клеток занимал 80-90% поверхности чашки, осуществляли пассирование культуры с использованием растворов версена и 0,25% трипсина, действие трипсина инактивировали добавлением полной ростовой среды, плотность клеток при рассеве составляла не менее 50тыс.кл./мл. Подсчет клеток при пассировании культуры производили с использованием автоматического счетчика клеток Countess (Invitrogen, США) (рис. 1). Автоматический счетчик клеток позволяет сохранить информацию о количестве жизнеспособных и нежизнеспособных клеток, данные по их диаметру, долю жизнеспособных клеток от общего числа клеток в образце. В экспериментальных сериях использовали первичные культуры РПЭ третьего пассажа, достигшие 80-90% конфлуэнтности.