Особенности экспрессии FAS/APO-1 (CD95)-антигена и апоптоз лимфоцитов периферической крови в норме и при инфильтративном туберкулезе легких

• Автор: Юсупова, Рина Шаидовна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Челябинск
• Количество страниц: 107 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Апоптоз и его место в иммунных процессах

1.2. Характеристики Баз-Я и Баь-Ь

1.3. Роль апоптоза в патогенезе заболеваний человека

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Характеристика групп обследуемых

2.2. Процедура взятия крови

2.3. Определение субпопуляционной структуры лимфоцитов периферической крови

2.4. Оценка функциональной активности лимфоцитов периферической крови
2.5. Метод определения иммуноглобулинов
2.6. Определение циркулирующих иммунных комплексов
2.7. Определение антител к микобактериям туберкулеза
2.8. Определение кортизола и уровня ФНОа
2.9. Электрофоретическая документация процесса апоптоза
2.10. Морфологический метод документации апоптоза
2.11. Методы статистической обработки результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Экспрессия выявляемого МКАІСО-160 СБ95-антигена на лимфоцитах периферической крови здоровых доноров и взаимосвязь этого показателя с другими
параметрами иммунограммы

3.2. Экспрессия выявляемого МКА1СО-160 СБ95-антигена на
лимфоцитах периферической крови у больных инфильтративным
туберкулезом легких и взаимосвязь этого показателя с другими параметрами иммунограммы
3.3. Экспрессия СБ95 и апоптоз лимфоцитов у клинически здоровых
доноров и больных инфильтративным туберкулезом легких
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ДИССЕРТАЦИИ
АГ - антиген
АТ - антитело
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ГИНК - гидразид изоникотиновой кислоты
ЕКК - естественные киллерные клетки
ИЗДС - инсулинзависимый сахарный диабет
ИКК - иммунокомпетентные клетки
ИЛ - интерлейкин
ИФН - интерферон
ИС - индекс стимуляции
ИФА - иммуноферментный анализ
ИТЛ - инфильтративный туберкулез легких
КонА - конканавалин А
МВТ - микобактерии туберкулеза
МКА - моноклональные антитела
МЛ - митоген лаконоса
НК - натуральные киллеры
ОЛЛ - острый лимфобластный лейкоз
ОМЛ - острый миелобластный лейкоз
ПАРИ - поли(АДФ-рибозил)полимераза
ПЭГ - полиэтиленгликоль
РА - ревматоидный артрит
РБТЛ - реакция бласттрансформации лимфоцитов
СКВ - системная красная волчанка
СПИД - синдром приобретенного иммунодефицита
ТКР - Т-клеточный рецептор
ФГА - фитогемагглютинин
ФИТЦ -флюоресцеинизотиоцианат
ФИО - фактор некроза опухолей

al. (1993). Для экстрагирования ДНК мононуклеары суспендировали в 500 мкл 10 мМ трис-НС1-ЭДТА-буфера pH 7.4; 500 мкл раствора, содержащего 0.2% тритона Х-100 (ТЕ-буфер), центрифугировали при 1300 g в течение 15 мин. Супернатант, содержащий низкомолекулярные фрагменты ДНК, преципетировали 50% изопропиловым спиртом в присутствии 0.5 М NaCl в течение ночи при -20вС. Преципитат, содержащий фрагментированную ДНК, осаждали центрифугированием 13000 g при 4°С и хранили в 80% этаноле при -20°С. При подготовке к электрофорезу осадок, содержащий ДНК, высушивали на воздухе, растворяли в 20 мкл ТЕ-буфера и добавляли 5 мкл буфера (pH 8.0), содержащего 50% глицерина, 1 мМ ЭДТА и 0.25% бромфенолового синего. Концентрацию ДНК контролировали спектрофотометрически при 260 нм. Пробы нагревали до 60°С, вносили в лунки и подвергали электрофорезу в горизонтальном геле 1 % агарозы, приготовленном на трис-ацетатном буфере pH 8.0 и содержащем бромистый этидий (0.1 мкл /1 мл). ДНК вводили в лунки в том же буфере. Электрофорез осуществляли при напряжении 70 В и силе тока 60 мкА в течение 1 ч. Результаты электрофореза оценивали по флюоресценции фракций, содержащих ДНК, в проходящем УФ-свете на трансиллюминаторе. На том же приборе фотографировали электрофореграммы.
2.10. Морфологический метод документации апоптоза
Для выявления клеток с морфологическими признаками апоптоза клетки предварительно выделяли по методу A. Boyum (1968) (см. раздел 2.3). Окрашивание красителем Hoechst 33342 (Boehringer Mannheim) заключается в том, что все ядросодержащие клетки накапливают данный краситель. При подсчете на люминесцентном микроскопе при длине волны возбуждения 360 нм и эмиссии 470 нм ядра клеток имеют голубую окраску. У апоптотирующихся клеток ядра имеют фрагментированный вид в отличие от жизнеспособных клеток.